生活習慣病モデルメダカを用いた歯周病合併症の予防抑制効果を示す食品由来物質の探索

本年度は非アルコール性脂肪肝炎（NASH），骨粗しょう症の疾患モデルを確立し，解析を行った。NASHモデルメダカでは，2-3ヶ月齢のCabメダカに12週間通常食（ND）または高脂肪食（HFD）を投与し，肝臓を採取して形態学的解析，組織学的解析，GC/MSによる脂肪酸分析，脂質代謝遺伝子・炎症性サイトカインの遺伝子発現解析を行った。また，同時に採取した腸管内容物を用いて腸内細菌叢解析を行った。その結果，ND群と比較してHFD群では，肝臓の組織切片のHE染色や脂肪染色から脂肪の蓄積や細胞の風船化変性が認められた。またGC-MSによる肝臓中の全脂肪酸量の分析では脂肪酸量の増加，特にパルミチン酸の増加が認められた。腸内細菌叢解析からは，ND群とは全く異なる細菌叢構造であり多様性の低下が認められ，dysbiosisの状態であることが示唆された。一方，骨粗しょう症モデルでは，トリプトファン水酸化酵素（tph2）を欠損した3ヵ月齢および6ヵ月齢メダカ（tph2－/－）を，麻酔下で屠殺してホルマリン固定し， X線トモグラフィーを使用して骨構造を評価した。また骨質を評価するため，屠殺したメダカを解剖し骨を回収して，原子吸光光度法により骨のカルシウム含量を測定した。その結果，tph2－/－メダカでは加齢に伴い明らかな骨の湾曲がみられ，骨のカルシウム含量の低下傾向が見られた。また，これら生活習慣病モデルへの歯周病原細菌の影響を調べるために，メダカへ投与方法の検討を行った。まず，メダカ生餌であるアルテミアを用いて慢性歯周病の病原細菌であるP. gingivalis（Pg）を取込ませ，これを透明メダカ（SKII）に投与すると，蛍光標識したPgが腹部，解剖すると腸管上部に蛍光が検出された。また液体培養したPgを加熱殺菌したのち，凍結乾燥して，混餌することにより投与したところ，問題なく摂食することを確認した。

本年度は非アルコール性脂肪肝炎（NASH），骨粗しょう症の疾患モデルを確立し，解析を行った。NASHモデルメダカでは，2-3ヶ月齢のCabメダカに12週間通常食（ND）または高脂肪食（HFD）を投与し，肝臓を採取して形態学的解析，組織学的解析，GC/MSによる脂肪酸分析，脂質代謝遺伝子・炎症性サイトカインの遺伝子発現解析を行った。また，同時に採取した腸管内容物を用いて腸内細菌叢解析を行った。その結果，ND群と比較してHFD群では，肝臓の組織切片のHE染色や脂肪染色から脂肪の蓄積や細胞の風船化変性が認められた。またGC-MSによる肝臓中の全脂肪酸量の分析では脂肪酸量の増加，特にパルミチン酸の増加が認められた。腸内細菌叢解析からは，ND群とは全く異なる細菌叢構造であり多様性の低下が認められ，dysbiosisの状態であることが示唆された。一方，骨粗しょう症モデルでは，トリプトファン水酸化酵素（tph2）を欠損した3ヵ月齢および6ヵ月齢メダカ（tph2－/－）を，麻酔下で屠殺してホルマリン固定し， X線トモグラフィーを使用して骨構造を評価した。また骨質を評価するため，屠殺したメダカを解剖し骨を回収して，原子吸光光度法により骨のカルシウム含量を測定した。その結果，tph2－/－メダカでは加齢に伴い明らかな骨の湾曲がみられ，骨のカルシウム含量の低下傾向が見られた。また，これら生活習慣病モデルへの歯周病原細菌の影響を調べるために，メダカへ投与方法の検討を行った。まず，メダカ生餌であるアルテミアを用いて慢性歯周病の病原細菌であるP. gingivalis（Pg）を取込ませ，これを透明メダカ（SKII）に投与すると，蛍光標識したPgが腹部，解剖すると腸管上部に蛍光が検出された。また液体培養したPgを加熱殺菌したのち，凍結乾燥して，混餌することにより投与したところ，問題なく摂食することを確認した。