The study of X chromosome inactivation maintenance in primate.

灵长类X染色体失活维持的研究。

基本信息

  • 批准号:
    22H02539
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 11.32万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
  • 财政年份:
    2022
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2022-04-01 至 2027-03-31
  • 项目状态:
    未结题

项目摘要

本研究では、(1) カニクイザル初代培養体細胞を利用して、霊長類のXCI維持機構を解明し、次いで, (2)カニクイザル着床後胚を用いて、XCI確立から維持に至る経路を明らかにする研究を行う。本年度はCRISPR/Cas9システムを用いてXIST KO(プロモーター欠損)初代培養体細胞を作製し、これら細胞において不活性X染色体に特異的なヒストン修飾を蛍光免疫染色で解析し、XIST及びX連鎖遺伝子の発現をRNA FISH を用いてXIST KO体細胞のおけるX連鎖遺伝子の再活性化状態を解析し、XISTのXCI維持における必要性を検討した。その結果、不活性X染色体に特異的ヒストン修飾はH3K9me3以外は全て消失し、不活性化維持に必要であると報告されているSmcHD1の蓄積は維持されてていたが、X連鎖遺伝子の発現は認められなかった。これらの結果から、XISTは体細胞の不活性化X染色体の特異的ヒストン修飾維持に必要であるが、X連鎖遺伝子の発現抑制維持には必要ない事を明らかにした。さらに、XCI維持へのSmcHD1の機能を解析するために、XIST KO 体細胞のSmcHD1 をさらにKOし、同様の解析を行なった。XIST KO +SmcHD1 KO細胞で、SmcHD1の消失は確認できたが、不活性XからのX連鎖遺伝子の再発現は認めらなかった。この結果から、SmcHD1もX連鎖遺伝子の発現抑制維持には必要ない事を明らかにした。
This study was conducted to investigate (1) the utilization and development of XCI maintenance mechanisms in primary cultured somatic cells, and (2) the utilization and development of post-implantation embryos. This year, we discussed the use of CRISPR/Cas9 gene expression in primary culture of XIST KO cells, the need for cell specific X-chromosome modification, photoimmunostaining analysis, XIST and X-linked gene expression, RNA FISH analysis, and the need for XIST XCI maintenance. As a result, inactive X chromosome specific gene modification is completely absent except for H3K9 me3, and inactive gene maintenance is necessary. The results show that XIST is necessary for the maintenance of specific X-linked gene modification in somatic cells, and it is necessary for the maintenance of X-linked gene expression inhibition. XCI maintains SmcHD1 function analysis and XIST KO somatic SmcHD1 function analysis. XIST KO + SmcHD1 KO cells, SmcHD1 disappearance and re-identification of inactive X-linked genes As a result, SmcHD1 gene expression inhibition is necessary to maintain the growth and development of SmcHD1 gene.

项目成果

期刊论文数量(5)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
カニクイザルの発生過程におけるX染色体遺伝子量補正プログラム
食蟹猴发育过程中X染色体基因剂量校正程序
  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    西田壮汰;安博洋;槇村有紗;森下文浩;今村拓也;岡本郁弘
  • 通讯作者:
    岡本郁弘
Generation of functional oocytes from male mice in vitro
  • DOI:
    10.1038/s41586-023-05834-x
  • 发表时间:
    2023-03-15
  • 期刊:
  • 影响因子:
    64.8
  • 作者:
    Murakami, Kenta;Hamazaki, Nobuhiko;Hayashi, Katsuhiko
  • 通讯作者:
    Hayashi, Katsuhiko
Induction of fetal meiotic oocytes from embryonic stem cells in cynomolgus monkeys
  • DOI:
    10.15252/embj.2022112962
  • 发表时间:
    2023-03-16
  • 期刊:
  • 影响因子:
    11.4
  • 作者:
    Gyobu-Motani, Sayuri;Yabuta, Yukihiro;Saitou, Mitinori
  • 通讯作者:
    Saitou, Mitinori
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    $ 11.32万
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  • 资助金额:
    $ 11.32万
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