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The study of X chromosome inactivation maintenance in primate.

灵长类X染色体失活维持的研究。

基本信息

批准号：
22H02539
负责人：
岡本郁弘
金额：
$ 11.32万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2027-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H02539/
关键词：
X染色体の不活性化霊長類カニクイザル XIST SmcHD1

项目摘要

本研究では、(1) カニクイザル初代培養体細胞を利用して、霊長類のXCI維持機構を解明し、次いで, (2)カニクイザル着床後胚を用いて、XCI確立から維持に至る経路を明らかにする研究を行う。本年度はCRISPR/Cas9システムを用いてXIST KO（プロモーター欠損）初代培養体細胞を作製し、これら細胞において不活性X染色体に特異的なヒストン修飾を蛍光免疫染色で解析し、XIST及びX連鎖遺伝子の発現をRNA FISH を用いてXIST KO体細胞のおけるX連鎖遺伝子の再活性化状態を解析し、XISTのXCI維持における必要性を検討した。その結果、不活性X染色体に特異的ヒストン修飾はH3K9me3以外は全て消失し、不活性化維持に必要であると報告されているSmcHD1の蓄積は維持されてていたが、X連鎖遺伝子の発現は認められなかった。これらの結果から、XISTは体細胞の不活性化X染色体の特異的ヒストン修飾維持に必要であるが、X連鎖遺伝子の発現抑制維持には必要ない事を明らかにした。さらに、XCI維持へのSmcHD1の機能を解析するために、XIST KO 体細胞のSmcHD1 をさらにKOし、同様の解析を行なった。XIST KO ＋SmcHD1 KO細胞で、SmcHD1の消失は確認できたが、不活性XからのX連鎖遺伝子の再発現は認めらなかった。この結果から、SmcHD１もX連鎖遺伝子の発現抑制維持には必要ない事を明らかにした。

In this study, (1) the primary culture cells were used to understand the effects and sub-conditions of the primary culture cells by using the XCI maintenance mechanism, and (2) the embryos were implanted in the embryo after implantation, and the XCI was used to ensure the maintenance of the embryo. This year, CRISPR/Cas9 cells were used for primary culture of XIST KO, repair of inactive X chromosomes, photoimmunostaining analysis, XIST and X-link immunostaining for RNA FISH, XIST KO cell, X-link cell, X-link cell for reactivating status. The XIST XCI maintains that it is necessary to ensure that it is necessary. The result of the experiment, the correction of the characteristic of the inactive X chromosome, the complete disappearance of the H3K9me3, the inactivation of the report, the SmcHD1 of the inactivation, and the maintenance of the inactivity. the results of the results, the repair of the characteristics of the inactive X chromosome, the complete disappearance of the inactive X chromosome, the complete disappearance of the inactive X chromosome, the complete disappearance of the inactive X chromosome and the inactivation of the inactive X chromosome. The results showed that it was necessary to maintain the characteristics of the inactivated X chromosome of XIST cells, to maintain the necessary genes, and to maintain the inhibition of X-linked chromosomes. The data processing, XCI maintenance, SmcHD1 machine parsing, SmcHD1 processing, KO parsing, and parallel parsing. XIST KO + SmcHD1 KO "cell", SmcHD1 "disappear" to confirm the virus, inactive X "X" link "child" and then to see the error message. As a result of the results, the SmcHD1 X link has shown that it is necessary to suppress the maintenance of the system.