霊長類ES細胞に由来する血管内皮細胞の増殖機構解析と造血機能評価

灵长类ES细胞来源血管内皮细胞增殖机制分析及造血功能评价

基本信息

项目摘要

我々は、カニクイザルES細胞を用いて、臨床応用にむけた安全かつ高効率な血管内皮細胞の分化誘導のための技術開発を目指した。その結果、昨年度は、胚様体形成と平面培養を組み合わせた新規な分化誘導法により、無フィーダー環境下で従来よりも高い効率で細胞表面VE-cadherin陽性成熟血管内皮細胞を作成することに成功した。また、従来法では不可能であった継代が8回程度まで可能となった。本年度はこれらの技術をさらに改良して、1)より高い効率で血管内皮細胞を産生する、2)より多くの回数の継代を可能にする、3)in vivoでの機能発現を確認する、ことを目指した。その結果、1)については、細胞表面VE-cadherin発現を指標としたソーティングを行うことで、VE-cadherin陰性分画も血管内皮細胞としての特徴を全て有しおり、100%の効率で血管内皮細胞に分化していることが確認された。さらに、VE-cadherin陽性分画は、その後の培養を経ても90%以上のVE-cadherin発現を維持したまま増殖継代できることが確認され、高純度の継代可能な成熟血管内皮細胞を得ることができたと言える。また、2)に関しては、我々の方法により作成されたES細胞由来血管内皮細胞が8回程度の継代の後に「ストレス依存性老化」を起こして増殖停止することが明らかになったことから、細胞培養におけるストレスを減弱する方法につき検討したが、現時点では「ストレス依存性老化」そのものは止められないまでも、継代法の細部を工夫して10継代まで可能となった。3)については、ゲル状の細胞外マトリクス中にES細胞由来血管内皮細胞を封入したものを免疫不全マウスの皮下に移植し、一定時間の経過後に尾静脈から蛍光色素を注入することで体循環系との連絡の有無を確認する方法で、マウス体内での血管形成を確認できた。
In our hospital, we need to monitor the use of ES cells, the safety, the high rate, the differentiation of vascular endothelial cells, and the technology to guide the operation of vascular endothelial cells. According to the results of the experiment, last year, the blastocyst formation plane tissue culture, the new differentiation method, and the high rate of cell surface VE-cadherin mature vascular endothelial cells were successfully established in a non-invasive environment. It is not possible to change the degree of success in the past 8 years. This year, the technology has been improved, 1) the high prevalence rate of vascular endothelial cells has been improved, 2) the multiple cycles have been detected, and 3) the in vivo machine has been able to verify the accuracy and detect the target data. The results were as follows: 1) the results were as follows: 1) More than 90% of the total number of mature vascular endothelial cells can be confirmed by VE-cadherin after sex analysis, VE-cadherin and post-culture, and the mature vascular endothelial cells may be expressed in high-grade culture. (2) the formation of vascular endothelial cells from the origin of vascular endothelial cells is caused by the formation of ES cells. After the passage of blood vessels, the degree of endothelial cell formation is 8 times higher than that of the control group. At the same time, we need to know that we are not going to be in a bad situation, and the department of modern law is responsible for 10 times of aging. 3) the origin of vascular endothelial cells of ES cells in the extracellular cycle was sealed in the subcutaneous transplantation of immune insufficiency, and after a certain period of time, light pigments were injected into the immune system. There is a method of confirming the formation of blood vessels in vivo.

项目成果

期刊论文数量(7)
专著数量(0)
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会议论文数量(0)
专利数量(0)
霊長類動物胚性幹細胞の培養及び継代方法、並びにその分化誘導方法
灵长类动物胚胎干细胞的培养、传代方法及其分化诱导方法
  • DOI:
  • 发表时间:
    2007
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
霊長類(サル、ヒト)ES細胞からの無フィーダー培養による高効率な血管内皮細胞分化誘導法の開発-各サイトカインの役割の検討及びin vivoでの機能評価-。
利用灵长类(猴、人)ES细胞的无饲养培养物开发诱导血管内皮细胞分化的高效方法 - 检查每种细胞因子的作用并进行体内功能评估。
  • DOI:
  • 发表时间:
    2007
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    中原 正子;過足 芳子;佐伯 久美子;佐伯 晃一;中村 直子;松山 さと子;米田 麻子;小柳 真;近藤 靖;末盛 博文;中辻 憲夫;湯尾 明
  • 通讯作者:
    湯尾 明
Identification of human neutrophils during experimentally induced inflammation in mice with transplanted CD34+ cells from human umbilical cord blood
  • DOI:
    10.1532/ijh97.06040
  • 发表时间:
    2006-10-01
  • 期刊:
  • 影响因子:
    2.1
  • 作者:
    Doshi, Masaru;Koyanagi, Makoto;Yuo, Akira
  • 通讯作者:
    Yuo, Akira
The protein expression profile of cynomolus monkey embryonic stem cells in two-dimensional electrophoresis : a successful identifyication of multiple proteins using human databases
食蟹猴胚胎干细胞二维电泳蛋白表达谱:利用人类数据库成功鉴定多种蛋白
  • DOI:
  • 发表时间:
    2007
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Nakahara M;Saeki K;Yogiashi Y;Kimura A;Horiuchi A;Nakamura N;Yoneda A;Saeki K;Matsuyama S;Nakamura M;Toda T;Kondo Y;Kaburagi Y;You A
  • 通讯作者:
    You A
The protein expression profile of cynomolgus monkey embryonicstem cells in two-dimensional gel electrophoresis:a successful identification of multiple proteins using human databases.
食蟹猴胚胎干细胞二维凝胶电泳蛋白表达谱:利用人类数据库成功鉴定多种蛋白。
  • DOI:
  • 发表时间:
    2007
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Nakahara M;Saeki K;Yogiashi Y;Kimura A;Horiuchi A;Nakamura N;Yoneda A;Saeki K;Matsuyama S;Nakamura M;Toda T;Kondo Y;Kaburagi Y;Yuo A
  • 通讯作者:
    Yuo A
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  • 通讯作者:
    久保田 浩之
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  • DOI:
  • 发表时间:
    2012
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  • 作者:
    湯尾 明;佐伯 久美子;中村 直子;松山 さと子;西尾 美和子;佐伯 晃一;護 長谷川
  • 通讯作者:
    護 長谷川
MRM 法を用いた糖尿病性細小血管症バイオマーカーの探索
利用 MRM 方法寻找糖尿病微血管病变生物标志物
  • DOI:
  • 发表时间:
    2011
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  • 作者:
    本間 綾香;加納 圭子;佐藤 恵美;高橋 枝里;奥村 彰規;佐伯 久美子;湯尾 明;久保田 浩之;鏑木 康志
  • 通讯作者:
    鏑木 康志

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