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霊長類ES細胞維持因子の同定とその機能解析

灵长类ES细胞维持因子的鉴定及其功能分析

基本信息

批准号：
15039207
负责人：
北村俊雄
金额：
$ 3.2万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

マウスES細胞はサイトカインLIFによってその全能性が維持される。一方、サルやヒトなど霊長類のES細胞はLIFには反応せず、マウス胎児線維芽細胞(MEF)の抽出物によってその全能性が維持される。我々はMEF由来の分子で霊長類ES細胞の全能性維持を可能にする分子を同定するためにMEF由来のcDNAライブラリーを作製して、カニクイザル由来ES細胞の未熟性を維持する因子の発現クローニング法を試みた。それに加えて候補分子を絞りES細胞維持活性を有する分子を捜す実験も並行して行った。COS7細胞による発現クローニング法でES細胞の未熟性維持を指標にMEFのライブラリーをスクリーニングしたが単独でES細胞を維持できる因子を同定することはできなかった。一方、検索した候補分子のうちWnt3aにES細胞の維持を支持する活性があることが判明した。しかしながらWnt3a単独では長期間未熟性を維持することは不可能であった。また、マウスES細胞もある程度Wnt3aにより維持されることが判明したが、Wnt3a単独で維持した場合、ALP陽性など未熟性の指標となるマーカーはある程度保たれても、マウスを作る能力は急速に失われた。また、Wnt3aの精製度が上がると逆にES細胞維持能を失う傾向にあった。このことは、Wnt3aによるES細胞維持活性には何らかのco-factorの存在が必要であることを示している。以上の結果はES細胞の未熟性維持にはマウスにおいても霊長類のES細胞においてもMEF由来の複数の分子が必要であることを示している。

ES cells maintain their totipotency in the presence of LIF. The totipotency of extracts from embryonic embryonic germ cells (MEF) was maintained in vitro by LIF. We tried to identify the molecular origin of MEF and the gene expression of MEF derived ES cells. Add candidate molecules to ES cells to maintain activity COS7 cell development and maintenance of ES cell immaturity index MEF development and maintenance of ES cell immaturity index MEF development and maintenance factors The activity of ES cell maintenance was identified by the candidate molecule Wnt3a. It is impossible to maintain the immature nature for a long time. In addition, the degree of ES cells maintained by Wnt3a was determined to be higher than that by Wnt3a alone. In addition, the degree of ES cells maintained by Wnt3a was determined to be higher than that by ALP alone. In addition, the degree of ES cells maintained by Wnt3a was determined to be higher than that by ALP alone. Wnt3a has a tendency to lose its ability to maintain sperm. Wnt3a is the essential factor for ES cells to maintain their activity. The above results indicate that the immature nature of ES cells is maintained in the presence of multiple molecules.