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Development of technology for in vivo intestinal engineering by transplantation of organoids after epithelial removal by using newly-synthesized chelating agents.

使用新合成的螯合剂开发去除上皮后移植类器官的体内肠道工程技术。

基本信息

批准号：
22H03138
负责人：
中村哲也
金额：
$ 11.15万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2026-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

初年度となる令和4年度には、主として以下の成果を得た。1)サイズの異なる複数のPEG-EDTA合成と分析本研究のためにPEG-EDTAを考案し、すでに試作に成功した。ポリマーであるPEGは重合長を調節することで異なる分子サイズのものを得ることができる。本研究ではPEG部分の平均分子量約800、約2000、約4000など複数を準備し、異なるサイズのPEGにEDTAを結合させた新規化合物を合成した。異なるpHや温度条件における安定性をNMR解析などで検証をおこなった結果、これらPEG-EDTAが種々の条件下においても安定な化合物であることが明らかとなった。また、新規PEG-EDTAとCaイオンとの混合物のLC/TOF-MS分析の結果、PEG-EDTAがCaとの結合能を保持することも明らかになった。2)PEG-EDTAによる腸上皮剥離能の解析PEG-EDTAの大腸上皮剥離能をEDTAと対比し評価した。細片化したマウス腸組織を種々の濃度のキレート化合物溶液（PEG-EDTAまたはEDTA）に入れ攪拌震盪し、分離遊出する腸陰窩数を定量評価した結果（in vitroアッセイ）、分子サイズが増大するとやや遊離陰窩数の低下を認めるものの、PEG-EDTAが大腸上皮剥離能をもつことがわかった。開腹マウス大腸内腔にキレート化合物溶液（PEG-EDTAまたはEDTA）を注入する上皮剥離試験（in vivoアッセイ）でも、大腸の組織学的解析においてPEG-EDTAが上皮剥離効果を持つことが明らかにできた。

The first year and the fourth year have achieved the following results. 1) The synthesis and analysis of PEG-EDTA was successfully carried out in this study. PEGs are not available. In this study, PEG moieties with average molecular weights of about 800, about 2000 and about 4000 were synthesized. The stability of the compounds under different pH and temperature conditions was investigated by NMR analysis. The results of LC/TOF-MS analysis of PEG-EDTA-Ca mixture show that the binding energy of PEG-EDTA-Ca is maintained. 2) Analysis of PEG-EDTA Intestinal Epithelialization Performance PEG-EDTA Intestinal Epithelialization Performance Quantitative evaluation of the concentration of fine slice intestinal tissue species in compound solution (PEG-EDTA) under agitation, separation of the number of intestinal pits (in vitro), increase in molecular weight, reduction in the number of free pits, and PEG-EDTA for large intestine epithelial exfoliation. It is clear that PEG-EDTA can maintain the effect of epithelial peeling when injecting a compound solution (PEG-EDTA or EDTA) into the lumen of the large intestine during an open surgery.