脱分化脂肪細胞含浸真空凍結乾燥人工真皮による新規な再生医療導入創傷治療材の開発

本研究の目的は、脱分化脂肪細胞(Dedifferentiated Fat Cells、以下DFAT)を人工真皮に含浸させて真空凍結乾燥処理を施した創傷治療材 (DFAT含浸 真空凍結乾燥人工真皮)の創傷治癒促進効果を検証することである。今年度は下記を行った。①DFATの調整：SD 系ラットから採集した成熟脂肪細胞を、培地を満たしたフラスコで天井培養することで DFAT を単離した。自作簡易減圧浸透装置(象印社製簡易漬物器に圧力計を装着したもの) 内に人工真皮 (Pelnac、コラーゲンスポンジ単層タイプ、GUNZE)を静置し、その上にDFATを生理食 塩水に懸濁させて散布し-10cmHgと-70cmHgでそれぞれ2分間減圧し、その後H-E染色標本を作製して検討した。H-E染色標本で人工真皮断面の表層と下層の単位面積あたりに含浸されているDFAT数を計測したところ、-10cmHg群では表層に9.4±4.9個、下層に4.8±2.9個、-70cmHg群では表層に9.4±1.1個、下層に9±1.7個含浸していた。表層に含浸した細胞数は両群で差が無かったが、下層では-70cmHg群で有意に多く含浸しており、-70cmHgで2分間減圧浸透する方が人工真皮全層に細胞の含浸が得られることがわかった。②次いで①の条件で作成したDFAT含浸人工真皮を真空凍結乾燥機CHList(ALPHA1-4/2-4LSCplus, KUBOTA社製）を用いて真空凍結乾燥処理を施した。作成した凍結乾燥品および凍結乾燥品について走査電子顕微鏡で観察を行ったところ、凍結乾燥品では人工真皮のコラーゲンスポンジ内にDFTA細胞が確認された。真空凍結乾燥品ではコラーゲンスポンジ内には生理食塩水から析出したと考えられる塩化ナトリウムの結晶が観察されたが細胞としての形態は保たれていなかった。

本研究の目的は、脱分化脂肪細胞(Dedifferentiated Fat Cells、以下DFAT)を人工真皮に含浸させて真空凍結乾燥処理を施した創傷治療材 (DFAT含浸 真空凍結乾燥人工真皮)の創傷治癒促進効果を検証することである。今年度は下記を行った。①DFATの調整：SD 系ラットから採集した成熟脂肪細胞を、培地を満たしたフラスコで天井培養することで DFAT を単離した。自作簡易減圧浸透装置(象印社製簡易漬物器に圧力計を装着したもの) 内に人工真皮 (Pelnac、コラーゲンスポンジ単層タイプ、GUNZE)を静置し、その上にDFATを生理食 塩水に懸濁させて散布し-10cmHgと-70cmHgでそれぞれ2分間減圧し、その後H-E染色標本を作製して検討した。H-E染色標本で人工真皮断面の表層と下層の単位面積あたりに含浸されているDFAT数を計測したところ、-10cmHg群では表層に9.4±4.9個、下層に4.8±2.9個、-70cmHg群では表層に9.4±1.1個、下層に9±1.7個含浸していた。表層に含浸した細胞数は両群で差が無かったが、下層では-70cmHg群で有意に多く含浸しており、-70cmHgで2分間減圧浸透する方が人工真皮全層に細胞の含浸が得られることがわかった。②次いで①の条件で作成したDFAT含浸人工真皮を真空凍結乾燥機CHList(ALPHA1-4/2-4LSCplus, KUBOTA社製）を用いて真空凍結乾燥処理を施した。作成した凍結乾燥品および凍結乾燥品について走査電子顕微鏡で観察を行ったところ、凍結乾燥品では人工真皮のコラーゲンスポンジ内にDFTA細胞が確認された。真空凍結乾燥品ではコラーゲンスポンジ内には生理食塩水から析出したと考えられる塩化ナトリウムの結晶が観察されたが細胞としての形態は保たれていなかった。