血管内皮細胞、線維芽細胞含有人工皮膚の作成

制造含有血管内皮细胞和成纤维细胞的人造皮肤

• 批准号: 10770981
• 负责人: 副島 一孝
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770981/
• 关键词: 血管内皮細胞、; 表皮角化細胞、; 同種移植、; T細胞活性化因子、; HLA-DR、; B7; 血管内皮細胞; 表皮角化細胞; 真皮線維芽細胞

血管内皮細胞(EC)と表皮角化細胞(KC)からなるハイブリッド型人工皮膚の作製法としてFabrication法(組立法)とCoculture法(共培養法)とを検討した。Fabrication法ではKCとECとを別個に培養した後、コラーゲンゲルを添加したコラーゲンテンプレート上にECシートとKCシートを貼付して調整した。しかしFabrication法では堅固な培養皮膚を調整することは難しかった。一方Coculture法では、KCとECとの直接的な共培養は困難であり、真皮線維芽細胞(FB)の介在が必要であることがわかった。すなわち、血管内皮細胞を含有したBell型培養皮膚の構築法が、現時点では有効な方法と考えられた。次に、血管内皮細胞の同種移植の可能性を検討する目的で、インターフェロン-γ(INF-γ)処理前後におけるヒト血管内皮細胞(hEC)のT細胞活性化因子すなわち主刺激因子MHCクラスII分子や二次刺激因子B7などの発現を検索した。具体的にはチャンバースライド上で培養したECを100U/mlIFN-γで48時間インキュベーション後、4%パラホルムアルデヒドで固定し、抗HLA-DR抗体や抗B7抗体などを用いた免疫染色よりその発現を調べた。また、細胞接着分子ICAM-1やVCAM-1の発現も検討した。B7分子の表出しない非骨髄由来細胞がMHCクラスII分子を発現している場合、CD4^+T細胞の応答は、活性化ではなく免疫不応答になると言われている。マクロファージなどの骨髄由来細胞では、B7が陽性であるのに対してIFN-γ処理したECではB7は陰性であった。表皮角化細胞(KC)をIFN-γ刺激するとICAM-1やMHCクラスII分子は発現するがB7は陰性であり、ECもKCと同様な傾向を示している。同種EC移植によるCD4^+T細胞の応答は、活性化ではなく麻痺を誘導する可能性が示唆された。MHCクラスI分子の機能は低温処理により低下すると考えられているので、凍結保存したECはKCと同様に同種移植に利用できるものと思われる。

Vascular endothelial cells (EC) と epidermal keratinocytes (KC) か ら な る ハ イ ブ リ ッ ド type artificial skin の method for と し て Fabrication method (group) legislation と Coculture method (cocultivation method) と を beg し 検 た. Fabrication method of で は KC と EC と を another に cultivate し た, コ ラ ー ゲ ン ゲ ル を add し た コ ラ ー ゲ ン テ ン プ レ ー ト に on EC シ ー ト と KC シ ー ト を TieFu し て adjustment し た. <s:1> で the Fabrication method で the firm な the cultivated skin を the adjustment する the と と the difficult the った the った the difficult った the った the difficult った the った the difficult った the った. A Coculture method で は, KC と EC と の direct な trained は difficult で あ り, leather line d bud cells (FB) の interface in が necessary で あ る こ と が わ か っ た. Youdaoplaceholder0, vascular endothelial cells を contain た, Bell type culture skin <s:1> construction method が, current point で えられた effective な method と study えられた. に, vascular endothelial cells の homograft の possibility を beg す 検 る purpose で, イ ン タ ー フ ェ ロ ン - gamma (INF - gamma) 処 Richard に before and after お け る ヒ ト vascular endothelial cells (hEC) の T cell activation factor す な わ ち the main stimulating factor MHC ク ラ ス II molecules や secondary stimulating factor B7 な ど の 発 now を 検 cable し た. Specific に は チ ャ ン バ ー ス ラ イ nurturing で ド し た EC を 100 u/mlIFN - 48 time gamma で イ ン キ ュ ベ ー シ ョ ン, 4% after パ ラ ホ ル ム ア ル デ ヒ ド で fixed し, resistance against HLA - DR antibody や B7 antibody な ど を with い た immune dyeing よ り そ の 発 now を adjustable べ た. Youdaoplaceholder0, the cell then follows the molecule ICAM-1やVCAM-1 <s:1> to present 検 検 and <s:1> た. B7 molecule の table out し な い origin of bone marrow cells が MHC ク ラ ス II molecules を 発 now し て い る occasions, CD4 + T cells の ^ 応 answer は, active で は な く immune 応 answer に な る と said わ れ て い る. マ ク ロ フ ァ ー ジ な ど の cells of bone marrow origin で は, B7 が positive で あ る の に し seaborne て IFN - gamma 処 Richard し た EC で は B7 は negative で あ っ た. Epidermal keratinocytes (KC) を IFN - gamma stimulus す る と や ICAM - 1 MHC ク ラ ス II molecules は 発 now す る が B7 は negative で あ り, EC も KC と with others な tendency を shown し て い る. Allogeneic EC transplantation of によるCD4^+T cells <s:1> 応 answer が, activation で なく なく paralysis を induction する possibility が indicates された. Function of MHC ク ラ ス I molecules の は cryogenic 処 Richard に よ り low す る と exam え ら れ て い る の で, freezing preservation し た EC は KC と with others に homograft に using で き る も の と think わ れ る.