Epigenetic regulation of multipotency in salivary gland stem cells

唾液腺干细胞多能性的表观遗传调控

• 批准号: 22H03264
• 负责人: 美島 健二
• 金额: $ 11.15万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H03264/
• 关键词: 唾液腺; エピジェネティック制御; 幹細胞; 多分化能

当該研究で利用する解析システムはChromium Next GEM Single Cell Multiome ATAC（10xGENOMICS）システムである。本システムの特徴は、細胞から単離した核からDNA およびRNAを抽出し、DNA はscATACseq にRNA はscRNAseq解析にそれぞれ利用される。一方、10xGENOMICSはこれまでMultiome解析に必要な基盤技術を報告しているが、唾液腺組織に関する核単離方法に関する詳細な報告はなされていない。そこで、当該年度では、Chromium Nuclei Isolation Kit（10xGENOMICS）のプロトコールを基本に、胎生期唾液線から解析に必要なQualityの核単離条件を検討した。まず、本システムで最低必要となる細胞数1,000,000細胞を採取するために必要な胎生期マウスの必要数を検討した。すなわち、胎生13.5日の胎仔マウスから両側の顎下腺を摘出し、摘出した唾液腺をヒアルロニダーゼとコラゲナーゼで処理後、Trypleにて細胞を分散化し細胞数を計測した。その結果、唾液腺あたり約100,000細胞の採取が可能なことが明らかとなった。当該研究で必要とされる胎生16日および生後8週齢マウスの唾液腺から採取できる細胞数も同様にカウントし、胎生13.5日唾液腺は、妊娠マウス2腹、胎生16日唾液腺は1腹、および生後8週齢のマウスは1匹となることが明らかとなった。次に、これらのマウスより唾液腺をそれぞれ採取し、液体窒素で凍結し180℃の冷蔵庫で保存した。さらに、Chromium Nuclei Isolation Kitを用いて核を単離し、細胞数のカウントと位相差顕微鏡を用いて単離核のQuality を評価する事により核抽出の条件を検討し、その再現性について確認している。

When the study is based on the analysis of Chromium Next GEM Single Cell Multiome ATAC (10xGENOMICS) data, it is necessary to analyze the data. This device is characterized by DNA, RNA, scATACseq, RNA, scRNAseq parsing, and leveraging. On the one hand, 10xGENOMICS is responsible for the Multiome analysis of the necessary basic technical reports, the salivary gland tissue, the nuclear isolation method, and the salivary gland tissue. It is necessary to analyze the saliva line of the year, Chromium Nuclei Isolation Kit (10xGENOMICS), basic saliva, fetal saliva, and the condition of isolation of the Quality. The minimum necessary number of cells is 1000000, the number of cells is 1000000, and the number of fetal period is very low. After 13.5 days of birth, the lower glands were removed, the salivary glands were removed, the salivary glands were removed, and Tryplegic cells were dispersed. The results showed that the salivary glands were isolated from about 100000 cells, and the results showed that the salivary glands were not affected. When the study was conducted on the 16th day of birth, the number of salivary glands was taken 8 days after birth, the number of salivary glands was the same as that of pregnant women, 13.5 days of gestation, 2 abdomens of pregnancy, 1 abdomen of salivary glands on the 16th day of birth, 1 abdomen of salivary glands on the 16th day of birth, and 1 baby in 8 days after birth. The salivary glands were removed from the salivary glands, and the liquid asphyxia was stored at 180 ℃. The number of cells in the Quality is slightly different, the number of cells is small, the number of cells is separated, the number of cells, the number of cells.