口腔扁平上皮癌におけるPKCεの役割と薬剤感受性への関与について

PKCε在口腔鳞状细胞癌中的作用及其与药物敏感性的关系

基本信息

批准号：
12770092
负责人：
美島健二
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Nara Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770092/
关键词：
PKCε 遺伝子導入口腔扁平上皮癌細胞死薬剤感受性 MAPKs

项目摘要

Protein kinase C epsilon(PKCε)を発現する組換えアデノウイルス(Ad-PKCε)をAdenovirus Expression kit(宝酒造)により作成し、ヒト口腔扁平上皮癌細胞株(SCC4、SCC15、IMC-2)において実際に組換え蛋白が発現されていることを確認した。Ad-βgalをコントロールウイルスとして用い、50MOIでそれぞれ感染させた。感染24時間後にのSCC4、SCC15およびIMC-2については100nMのPMA(PKCのactivator)を加えた。MTT assayにより24時間後の生細胞数を測定したところAd-PKCεを感染させた細胞はAd-βgalを感染させたものに比べていずれの細胞株でもおよそ30%の細胞数の減少が認められ細胞死が誘導された。この細胞死は形態的にアポトーシスではなく胞体内に空胞化を生じたネクローシスに近いものであった。つぎにwestern blottingによりcaspase-3のcleavageについて調べたが、いずれの細胞株でもcleavageはみとめられなかった。さらにこの細胞死がcaspaseの活性化を介しているのかどうか明らかにするため、caspase inhibitorであるz-VAD-FMK, DEJD-CHOおよびIETD-FMKを用いたが細胞死の抑制は認められなかった。従って、本研究により、PKCεが口腔扁平上皮癌細胞株にcaspaseを介さない細胞死を誘導することが明らかになった。

使用腺病毒表达试剂盒（Takara Shuzo）制备了表达蛋白激酶C epsilon（PKCε）的重组腺病毒（AD-PKCε），并确认重组蛋白实际上是在人口腔鳞状细胞癌细胞系中表达的。 AD-βGal用作对照病毒，并在50 MOI处感染。感染后24小时，为SCC4，SCC15和IMC-2添加了100 nm PMA（PKC的激活剂）。 MTT分析后24小时测量活细胞的数量，与感染AD-βGAL的细胞相比，所有细胞系中感染的细胞显示所有细胞系的细胞数量减少约30％，从而导致细胞死亡。这种细胞死亡在形态上与坏死相似，该坏死在内质中引起液泡。接下来，使用蛋白质印迹研究了caspase-3的裂解，但在任何一个细胞系中均未发现乳沟。此外，为了阐明该细胞死亡是否是通过caspase激活介导的，caspase抑制剂Z-VAD-FMK，DEJD-CHO和IETD-FMK使用了，但未观察到细胞死亡的抑制作用。因此，这项研究表明，PKCε在口服鳞状细胞癌细胞系中诱导caspase介导的细胞死亡。