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口腔扁平上皮癌におけるPKCεの役割と薬剤感受性への関与について

PKCε在口腔鳞状细胞癌中的作用及其与药物敏感性的关系

基本信息

批准号：
12770092
负责人：
美島健二
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Nara Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770092/
关键词：
PKCε 遺伝子導入口腔扁平上皮癌細胞死薬剤感受性 MAPKs

项目摘要

Protein kinase C epsilon(PKCε)を発現する組換えアデノウイルス(Ad-PKCε)をAdenovirus Expression kit(宝酒造)により作成し、ヒト口腔扁平上皮癌細胞株(SCC4、SCC15、IMC-2)において実際に組換え蛋白が発現されていることを確認した。Ad-βgalをコントロールウイルスとして用い、50MOIでそれぞれ感染させた。感染24時間後にのSCC4、SCC15およびIMC-2については100nMのPMA(PKCのactivator)を加えた。MTT assayにより24時間後の生細胞数を測定したところAd-PKCεを感染させた細胞はAd-βgalを感染させたものに比べていずれの細胞株でもおよそ30%の細胞数の減少が認められ細胞死が誘導された。この細胞死は形態的にアポトーシスではなく胞体内に空胞化を生じたネクローシスに近いものであった。つぎにwestern blottingによりcaspase-3のcleavageについて調べたが、いずれの細胞株でもcleavageはみとめられなかった。さらにこの細胞死がcaspaseの活性化を介しているのかどうか明らかにするため、caspase inhibitorであるz-VAD-FMK, DEJD-CHOおよびIETD-FMKを用いたが細胞死の抑制は認められなかった。従って、本研究により、PKCεが口腔扁平上皮癌細胞株にcaspaseを介さない細胞死を誘導することが明らかになった。

Expression of Protein kinase C epsilon(PKCε) was confirmed in oral squamous cell carcinoma cell lines (SCC4, SCC15, IMC-2) by Adenovirus Expression Kit. Ad-βgal can be used to detect the presence of the virus at 50 MOI. SCC4, SCC15 and IMC-2 were detected 24 hours after infection, and PMA(PKC activator) was detected at 100nM. The number of viable cells was determined 24 hours after MTT assay and the number of cells infected with Ad-PKCε was reduced by 30% compared with that of the cells infected with Ad-PKCε. The cell is in the middle of the cell, and the cell is empty.つぎにwestern blottingによりcaspase-3のcleavageについて调べたが、いずれの细胞株でもcleavageはみとめられなかった。Caspase activation is mediated by the use of caspase inhibitor z-VAD-FMK, DEJD-CHO and IETD-FMK. In this study, PKCε was used to mediate cell death in oral squamous cell carcinoma cell lines.