MPTPによるパ-キンソニズム発症の生化学的研究

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1.ミトコンドリアを用いた研究。(1)MPP^+によりNADH依存性O_2生成の誘導と脂質過酸化反応の増大。ウシ心筋亜ミトコンドリア粒子にMPP^+を加えると、ド-パミンニュ-ロンのミトコンドリアに存在すると思われる濃度でNADH依存性O_2生成を誘導した。O_2生成は、NADHーユビキノン還元活性がMPP^+で阻害されるのと並行した上昇した。MPP^+は、ADPーFe^<3+>存在下におけるNADH依存性脂質過酸化反応を増大させたが、コハク酸添加により抑制された。この抑制は、内在性ユビキノンの還元と相関していた。これらMPP^+によるO_2生成誘導と脂質過酸化反応の増大は、MPP^+による細胞死と関わっているものと考えられた。(2)MPP^+による脂質過酸化反応の抗NADHーユビキノン還元酵素抗体を用いた研究。パ-キンソン病の際、黒質ミトコンドリアのNADHー2ビキノン還元活性が選択的に低下しており、そのサブユニット量の低下がみられる。一方、ミトコンドリアの脂質過酸化反応により、NADHーユビキノン還元活性がまず低下することが知られている。よって、NADHーユビキノン還元酵素(ComplexI)をウシ心筋から精製し、それに対するウサギ抗体を作成した。この抗体を用いたコントロ-ル亜ミトコンドリア粒子に対するイムノブロットでは、約25本のバンドが認められたが、脂質過酸化反応を起こした粒子では、分子量約2.5万のバンドが消失していた。今後、PCー12細胞をMPP^+で処理した時のComplexIサブユニット動態について検討してゆくつもりである。2.培養ラット褐色細胞腫細胞(PCー12細胞)を用いた研究。培養PCー12細胞にMPP^+を加えると、細胞死がみられた。その半致死量は、約1mMであり、半致死時間は、約48時間であった。ユビキノンのアナログであるアバン(イデベノン)添加は、MPP^+による細胞死を抑制した。