培養血管内皮細胞の刺激時における代謝変化に関する研究

培养血管内皮细胞刺激过程中代谢变化的研究

基本信息

批准号：
62222019
负责人：
水上茂樹
金额：
$ 0.83万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Special Project Research
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62222019/
关键词：
培養血管内皮細胞細胞内pH ATP カルシウム Na^+H^+exchanger BCECF ナトリウム

项目摘要

血管内皮細胞はATPやトロンビンなどで刺激された時, プロスタグランジンや内皮細胞由来弛緩物質など血管拡張作用をもつ物質を放出する. しかし, その放出反応の制御機構についてはあまりよく判っていない. 細胞内pH(pHi)は, 全ての細胞内反応を制御していると考えられるので休止時および刺激時におけるpHiの変動とその制御機構を知ることは重要である. 今年度は, 培養ウシ大動脈内皮細胞のpHiを新しい螢光性pH指示薬BCECFを用いて測定し, 内皮細胞pHiを制御する機構と, ATPで刺激した時のpHi変化について検討した.1)プロピオン酸負荷時の細胞内pH変化内皮細胞の休止時pHiはpH7.30であった. 細胞にプロピオン酸ナトリウムを加えると, pHiは7.30から7.0に低下し, その後急速にアルカリ化が起こり5分後には休止時pHにもどった. このアルカリ化は細胞外Na濃度に依存しており, またヘキサメチレンアミロライドで阻害されたのでNa/H^+exchangerによって起こることがわかった.2)刺激時にみられる細胞内pH変化ATPで内皮細胞を刺激すると, 2相性のpHi変化がみられた. すなわち, 初期の酸性化相とそれにひき続いて起こるアルカリ化相である. 酸性化相は添加直後から始まり, 2〜3分後には0.1pHunitまで下がり, その後アルカリ化が起って15分後には休止時pHiより0.01pHunit上まで上昇し一定となった. ATPの効果は濃度依存的であり, そのIC_<50>は約1μMであった. アルカリ化相は細胞外Na濃度に依存し, アミロライドアナログで阻害されたのでNa^+/H^+exchargerによることがわかったが, 酸性化の原因については現在不明であり, 今後解決しなければならない問題である. またATPによるpHi変化は細胞外Caに依存していた.

当用ATP或凝血酶刺激血管内皮细胞时，它们会释放具有血管散发特性的物质，例如前列腺素和内皮细胞衍生的松弛剂。但是，控制释放响应的机制并不是很清楚。由于细胞内pH（PHI）被认为可以控制所有细胞内反应，因此重要的是要了解静止和刺激及其控制机制的PHI波动。今年，我们使用新的荧光pH指示剂测量了培养的牛主动脉内皮细胞的PHI，并检查了调节内皮细胞PHI PHI的机制以及ATP.1）在静止负载静止phi时静止pHI时的细胞内pH变化时的PHI变化。当将丙酸钠添加到细胞中时，PHI从7.30降低到7.0，然后迅速遵循碱化，5分钟后，pH恢复到静止状态。这种碱化的依赖于细胞外钠浓度，也被己二甲基氨基层抑制，因此发现Na/h^+交换剂。 2）当刺激过程中用ATP刺激内皮细胞时，观察到双相PHI变化。换句话说，最初将酸化阶段酸化，然后随后进行碱化。酸化阶段在添加后立即开始，在2-3分钟后，酸化阶段降低到0.1 Phunit，15分钟后，它上升到了REST PHI上方的0.01 Phunit，15分钟后，它变为恒定。 ATP的效果取决于浓度，其IC_ <50>约为1μm。碱化阶段取决于细胞外钠的浓度，发现酸化被淀粉样类似物抑制了酸化，但是酸化的原因目前尚不清楚，这是将来必须解决的问题。此外，由于ATP引起的PHI的变化取决于细胞外Ca。