权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

培養血管内皮細胞の刺激時における代謝変化に関する研究

培养血管内皮细胞刺激过程中代谢变化的研究

基本信息

批准号：
62222019
负责人：
水上茂樹
金额：
$ 0.83万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Special Project Research
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62222019/
关键词：
培養血管内皮細胞細胞内pH ATP カルシウム Na^+H^+exchanger BCECF ナトリウム

项目摘要

血管内皮細胞はATPやトロンビンなどで刺激された時, プロスタグランジンや内皮細胞由来弛緩物質など血管拡張作用をもつ物質を放出する. しかし, その放出反応の制御機構についてはあまりよく判っていない. 細胞内pH(pHi)は, 全ての細胞内反応を制御していると考えられるので休止時および刺激時におけるpHiの変動とその制御機構を知ることは重要である. 今年度は, 培養ウシ大動脈内皮細胞のpHiを新しい螢光性pH指示薬BCECFを用いて測定し, 内皮細胞pHiを制御する機構と, ATPで刺激した時のpHi変化について検討した.1)プロピオン酸負荷時の細胞内pH変化内皮細胞の休止時pHiはpH7.30であった. 細胞にプロピオン酸ナトリウムを加えると, pHiは7.30から7.0に低下し, その後急速にアルカリ化が起こり5分後には休止時pHにもどった. このアルカリ化は細胞外Na濃度に依存しており, またヘキサメチレンアミロライドで阻害されたのでNa/H^+exchangerによって起こることがわかった.2)刺激時にみられる細胞内pH変化ATPで内皮細胞を刺激すると, 2相性のpHi変化がみられた. すなわち, 初期の酸性化相とそれにひき続いて起こるアルカリ化相である. 酸性化相は添加直後から始まり, 2〜3分後には0.1pHunitまで下がり, その後アルカリ化が起って15分後には休止時pHiより0.01pHunit上まで上昇し一定となった. ATPの効果は濃度依存的であり, そのIC_<50>は約1μMであった. アルカリ化相は細胞外Na濃度に依存し, アミロライドアナログで阻害されたのでNa^+/H^+exchargerによることがわかったが, 酸性化の原因については現在不明であり, 今後解決しなければならない問題である. またATPによるpHi変化は細胞外Caに依存していた.

Vascular endothelial cells respond to ATP and other stimuli, including release of relaxant substances from endothelial cells and vasomotor substances. In addition, the control mechanism of the anti-dumping system is not allowed to be used. Intracellular pH(pHi) is the key to the regulation of intracellular pH in the whole process. In this year, the pHi of cultured endothelial cells was determined by fluorescent pH indicator BCECF. The pHi of endothelial cells was controlled by ATP. The pHi of endothelial cells was changed during ATP stimulation. The pHi of endothelial cells was changed during acid loading. Cell pH is increased, pHi is decreased from 7.30 to 7.0, and then it is rapidly decreased from 5 minutes to 5 minutes. The change of intracellular pH and ATP during stimulation of endothelial cells depends on extracellular Na concentration. 2) The change of intracellular pH and ATP during stimulation of endothelial cells depends on the change of intracellular pH and pH during stimulation. In the early stage of acidification, the phase of acidification begins. Acidic phase is added directly after the beginning, 2 ~ 3 minutes later, 0.1pHunit below, 15 minutes later, 0.01pHunit above. ATP effect is concentration-dependent, IC_<50>is about 1μM. The chemical phase is dependent on extracellular Na concentration, and the cause of acidification is unknown. The problem will be solved in the future. pHi is dependent on extracellular Ca.