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脳ニュ-ロン損傷と防御の機序に関する分子病態薬理学的研究

脑神经元损伤及防御机制的分子病理药理学研究

基本信息

批准号：
03263203
负责人：
野村靖幸
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

グルタミン酸による神経細胞死の分子機構を解明する目的で、1)学習記憶障害を早期より引き起こす老化促進モデルマウス(SAM)のグルタミン酸ニュ-ロン系の加齢変化、2)ラット胎仔脳初代培養ニュ-ロンのグルタミン酸の作用、3)ラット脳の後シナプス肥厚部を用いて各種プロテインキナ-ゼによる各種グルタミン酸受容体/チャネルの調節機構および4)ラット脳mRNAをアフリカツメガエル卵母細胞に微量注入して各種グルタミン酸受容体/チャネルを再構成させ、その電流応答に対するCキナ-ゼの調節機構について解析した。1)SAM大脳皮質および海馬において生後2ケ月齢よりグルタミン酸およびグルタミン含量が増加していた。また、NMDA受容体/チャネル数は加齢によって減少し、NMDA誘発アセチルコリン放出活性も低下していた。これらのことから、SAM脳において早期よりグルタミン酸生合成あるいは代謝機能の異常が起こることによってグルタミン酸が蓄積すること、これにより脳内ニュ-ロンに障害が引き起こされると示唆された。また、加齢にともなって加速的なグリオ-シスおよびシナプスの脆弱性も示された。2)ラット胎仔脳初代培養ニュ-ロンは、グルタミン酸およびNMDA処置により24時間後には50%以上のニュ-ロンが細胞死を引き起こした。Mg^<2+>非存在下NMDAを作用させると細胞外Ca^<2+>の流入による細胞内Ca^<2+>濃度の上昇が認められた。3)ラット脳の後シナプス肥厚部のNMDA受容体/チャネルは、精製Cキナ-ゼおよびカルモジュリン(CaM)キナ-ゼIIのリン酸化処理によってopen channel blockerのMK‐801結合親和性が増加すること、また精製cyclic AMP依存性プロテインキナ-ゼによるリン酸化処理では結合活性は変化しなかった。このことから、Cキナ-ゼおよびCaMキナ-ゼIIはチャネル部位をリン酸化し、チャネルが開口し状態になることが示唆された。4)ラット脳のmRNAをアフリカツメガエル卵母細胞に微量注入し、ラット脳グルタミン酸受容体を再構成した。この系でCキナ-ゼを活性化させるホルボ-ルエステル処置によって、代謝型グルタミン酸受容体応答電流は消失したが、AMPAおよびカイニン酸受容体応答電流には変化が認められなかった。一方、NMDA受容体電流応答は、約2倍に増大し、この作用には細胞外Ca^<2+>の流入が必要であった。このことからも、NMDA受容体/チャネルはCキナ-ゼおよびCaMキナ-ゼIIのリン酸化によって細胞外Ca^<2+>の流入が増強されることが示唆された。

グルタミン acid による神経の molecular mechanism を clarification する purpose で, 1) learning and memory impairment を early より inducing きこす aging promotion モデルマウス (SAM) のThe addition of グルタミンニュ-ロン series, 2) the primary culture of ラットfetal virus The effect of ュ-ロンのグルタミン acid, 3) ラット脳の后シナプス Hypertrophic part をUse various プロテインキナ-ゼによる various グルタミン acid receptors/チャネルのregulatory mechanismおよび4)ラット脳mRNAをアフリカツメガエル egg Microinjection of mother cells and reconstruction of various chlorinated acid receptorsせ、そのcurrent 応answerに対するCキナ-ゼの regulating mechanism についてanalyticsした. 1) SAM large skin cortical および海马においてafterbirth 2ケ月颢よりグルタミン acid およびグルタミンcontent がincreased and していた. NMDA receptors/Hydrocytes are reduced in activity, and NMDA-inducing receptors and NMDA receptors are released in low activity.これらのことから、SAM 脳においてEarly よりグルタミンAcid synthesis あるいはAbnormal metabolism function が出こることThe acid is stored内ニュ-ロンに hinders the cause and causes the problem.また, add the 齢にともなって accelerated なグリオ-シスおよびシナプスのfragility もshow された. 2) NMDA department of the primary culture of ラットfetal culture ニュ-ロンは and グルタミン acid およびAfter 24 hours of incubation, more than 50% of the cells will be dead and the cells will die. In the absence of Mg^<2+>, the action of NMDA causes an influx of extracellular Ca^<2+> and an increase in intracellular Ca^<2+> concentration. 3) NMDA receptor of ラット脳の后シナプスhypertrophic part/チャネルは, purified Cキナ-ゼおよびカルモジュリン(CaM) キナ-ゼII のリン acidification treatment によってopen Channel blockerのMK-801 Binding affinity が Increase plus すること、またRefined cyclic AMP-dependent プロテインキナ-ゼによるリン acidification treatment では combined with active は変化しなかった.このことから、Cキナ-ゼおよびCaMキナ-ゼIIはチャネル部Bit をリン acidification し, チャネルがopening し status になることがshows instigation された. 4) Micro-injection of ラット焳のmRNA をアフリカツメガエル oocyte and reconstitution of ラット脳グルタミン acid receptor.この-type Cキナ-ゼをactivated させるホルボ-ルエステル treatment によって, metabolic グルタミン acid receptor The current disappears and the AMPA acid acceptor responds to the current and the current changes and the current changes. On the one hand, the NMDA receptor current response is approximately 2 times larger, and the effect is necessary for the inflow of extracellular Ca^<2+>.このことからも、NMDA receptor/チャネルはCキナ-ゼおよびCaMキナ-ゼI The acidification of IのリンによってThe inflow of extracellular Ca^<2+> is strengthened and the influx of extracellular Ca^<2+> is strengthened.