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増殖因子受容体とGTP結合蛋白との共役機構の解明

阐明生长因子受体与 GTP 结合蛋白之间的偶联机制

基本信息

批准号：
04253205
负责人：
村山芳武
金额：
$ 6.4万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至 1993
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は、抗G蛋白抗体でコートしたELISA plateを用いて、調製細胞膜に対するGTPrS結合活性を見ることによって特定のG蛋白の活性を細胞膜の系で検出する新しい方法を開発した。インスリン様増殖因子II型受容体(IGF-IIR)の細胞内領域の2410残基-2423残基領域(ペプチド14)欠損した変異IGF-IIRを細胞膜に発現してGi2に対するGTPrS結合活性をこの方法で調ベた。その結果、IGF-IIによるGi2活性化がほとんど見られなかった。このことから、IGF-IIRがペプチド14領域を介してGi2と共役することがわかる。すでに我々は、ペプチド14の構造上の特徴から、G蛋白活性化配列criteriaを得ていた。これを受容体以外の蛋白についても適用した。具体的には受容体様講造をしているがその機能が明らかでないAlzheimer amyloid protein precursor(APP)の細胞内領域に我々のcriteriaを満たす配列を発現したので、当該領域の意義について検討した。APPは1回膜貫通構造をとっているが、その細胞内領域に一箇所、657-676残基(HHGVVEVDAAVTPEERHLSK)に我々のcriteriaを満たす配列が存在する。この20残基の合成ペプチド(ペプチド20)が時間依存性、容量依存性にGoを活性化し、APP695の他の領域にはGo活性化能がないことが判明した。ペプチド20によるGoに対するGTPrS結合能上昇はMg^<2+>濃度が100nMから1mMの範囲でみられること、百日咳毒素を処理したGoでは効果が弱くなることも明らかとなった。次に我々は、APPに対するモノクローナル抗体と抗G蛋白抗体を用いてAPPが特異的にGoαと共沈することを示した。次に変異APPを細胞膜に発現させて、in vivoの係でAPPがペプチド20領域を介してCoαと関わっていることも証明した。これらの結果から、アルツハイマー病の原因にGoが何らかの役割を果たしている可能性が高い。今年度はIGF-IIRばかりでなく受容体以外の蛋白についても、我々のG蛋白活性化配列criteriaが有用であることを示した。

We have developed a new method for the detection of GTPrS binding activity in cell membrane systems using ELISA plate for anti-G protein antibodies. The intracellular domain of IGF-IIR from residue 2410 to residue 2423 (SEQ ID NO: 14) is deficient in the expression of IGF-IIR in the cell membrane. IGF-II, IGF-II, IGF-II, Today, IGF-IIR will serve as a partner in the field of selection and selection for Gi2. The structural characteristics of the protein 14 and the alignment criteria for G protein activation were determined. This is the first time a protein has been detected outside of a receptor. Specific criteria for the assignment of Alzheimer amyloid protein precursor(APP) in the intracellular domain are presented in the context of receptor construction, and the significance of the domain is discussed. APP1 membrane penetration structure, the intracellular domain of a site, residues 657-676 (HHGVEVDAAVTPEERHLSK), the criteria for the existence of a site The synthesis of these 20 residues is time-dependent and capacity-dependent, and the activation of APP695 in other domains is also identified. GTPrS binding capacity increased from 100nM to 1mM when treated with pertussis toxin. The second is to use APP-specific antibodies against G protein. In addition, different APP can be found in the cell membrane, in vivo and in vivo. The cause of the disease is highly probable. This year, IGF-IIR has been shown to be useful for protein activation and alignment criteria other than receptors.