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DNA組換えにおけるRuvA,B,Cタンパクの機能解析

DNA 重组中 RuvA、B 和 C 蛋白的功能分析

基本信息

批准号：
04262205
负责人：
品川日出夫
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至 1992
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04262205/
关键词：
RuvAタンパク RuvBタンパク RuvCタンパク ruvA遺伝子 ruvB遺伝子 ruvC遺伝子 DNA組換え Holliday構造

项目摘要

遺伝学的研究によって、大腸菌のruvA,ruvB,ruvC遺伝子の産物は相同的DNA組換えの後期温程に関与すると考えられている。私達は前年度迄の研究の結果、RuvAとRuvBタンパクは複合体を形成して組換え中間体であるHolliday構造の移動を促進する機能をもつという仮説をたて、本年度の研究によってこの仮説を証明した。又RuvCはHolliday構造を切断して組換え体を分離する特異的なエンドヌクレアーゼであることを前年度に証明したが、本年度は更にRuvCの性質を化学的に解析した。1.RuvAとRuvBタンパクは各々4量体と2量体を形成し、この比率で、両者は安定な複合体を水溶液中で形成することを証明した。2.合成DNAを用いて、Holliday構造のアナログである十字型DNAを作成し、RuvAがHolliday構造に特異的に結合する性質をもつ、RuvBはこの結合能を促進することを証明した。3.RuvA-RuvB複合体は十字型DNAに結合して、ATPの存在下で二重鋭DNAを巻きもどして分離する活性(Holliday構造特異的ヘリケス)をもつことを発見した。4.RuvA-RuvB複合体は、RecAタンパクによって形成されたHolliday構造に作用して、ATP分解のエネルギーを利用してHollidy junctianの移動させる(branch migration)活性をもつことを証明した。5.種々の構造をもつDNAを作成して、RubCは十字型およびY型DNAに特異的に結合するが、切断するためには中央のコア部分にホモロジーが存有することが必要であることが示された。6.RuvCのエンドヌクレアーゼ活性の至適pHは6〜9で、2価金属イオンが活性に必須で、高濃度の1価の金属塩は阻害的であることを明らかにした。

Genetics research, Escherichia coli ruvA,ruvB,ruvC gene products are the same DNA genome transformation and late temperature process related to the study of the Chinese. The research results of the previous year showed that RuvA and RuvB can be used to form and transform the complex, and the function of Holliday structure can be promoted. The research results of this year proved that RuvA and RuvB can be used to form and transform the complex. The structure of RuvC is separated from the original structure. 1. RuvA, RuvB, RuvB, RuvA, RuvB, RuvA, RuvB, RuvB, 2. This paper demonstrates that synthetic DNA can be used in the production of cruciform DNA, that RuvA can bind specifically to Holliday structure, and that RuvB can promote binding. 3.RuvA-RuvB complex showed double sharp DNA binding activity (Holliday structure-specific activity) in the presence of ATP. 4.RuvA-RuvB complex is proved to be active in the formation of Holliday structure, ATP decomposition and utilization of Holliday junctian (branch migration). 5. The structure of RubC is made up of cruciform and Y-shaped DNA. 6. RuvC is active to pH 6 ~ 9, 2 ~ 10 metals are active, and 1 ~ 10 metals are active at high concentrations.