DNA組換えにおけるRuvA,B,Cタンパクの機能解析

DNA 重组中 RuvA、B 和 C 蛋白的功能分析

• 批准号: 04262205
• 负责人: 品川 日出夫
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 1992
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04262205/
• 关键词: RuvAタンパク; RuvBタンパク; RuvCタンパク; ruvA遺伝子; ruvB遺伝子; ruvC遺伝子; DNA組換え; Holliday構造

遺伝学的研究によって、大腸菌のruvA,ruvB,ruvC遺伝子の産物は相同的DNA組換えの後期温程に関与すると考えられている。私達は前年度迄の研究の結果、RuvAとRuvBタンパクは複合体を形成して組換え中間体であるHolliday構造の移動を促進する機能をもつという仮説をたて、本年度の研究によってこの仮説を証明した。又RuvCはHolliday構造を切断して組換え体を分離する特異的なエンドヌクレアーゼであることを前年度に証明したが、本年度は更にRuvCの性質を化学的に解析した。1.RuvAとRuvBタンパクは各々4量体と2量体を形成し、この比率で、両者は安定な複合体を水溶液中で形成することを証明した。2.合成DNAを用いて、Holliday構造のアナログである十字型DNAを作成し、RuvAがHolliday構造に特異的に結合する性質をもつ、RuvBはこの結合能を促進することを証明した。3.RuvA-RuvB複合体は十字型DNAに結合して、ATPの存在下で二重鋭DNAを巻きもどして分離する活性(Holliday構造特異的ヘリケス)をもつことを発見した。4.RuvA-RuvB複合体は、RecAタンパクによって形成されたHolliday構造に作用して、ATP分解のエネルギーを利用してHollidy junctianの移動させる(branch migration)活性をもつことを証明した。5.種々の構造をもつDNAを作成して、RubCは十字型およびY型DNAに特異的に結合するが、切断するためには中央のコア部分にホモロジーが存有することが必要であることが示された。6.RuvCのエンドヌクレアーゼ活性の至適pHは6〜9で、2価金属イオンが活性に必須で、高濃度の1価の金属塩は阻害的であることを明らかにした。

But 伝 learn study に よ っ て, coliform の ruvA, ruvB, ruvC heritage 伝 son は の products of the same set of DNA in え の late WenCheng に masato and す る と exam え ら れ て い る. Private of annual effect before は の の research results, RuvA と RuvB タ ン パ ク は complex を form し て group in え intermediates で あ る Holliday tectonic の mobile を promote す る function を も つ と い う 仮 said を た て, this year's の に よ っ て こ の 仮 said を prove し た. Group and RuvC は Holliday tectonic を cut し て in え body を separation す る specific な エ ン ド ヌ ク レ ア ー ゼ で あ る こ と を before annual に prove し た が, this year's は more に RuvC の nature を chemical analytical し に た. 1. RuvA と RuvB タ ン パ ク は 々 4 each quantity body と 2 quantity body を し, こ の ratio で, struck は settle な complex を で formed in aqueous solution す る こ と を prove し た. 2. The synthetic DNA を with い て, Holliday structure の ア ナ ロ グ で あ る cross DNA を し, consummate RuvA が Holliday structure に specific に with す る nature を も つ, RuvB は こ の binding energy を promote す る こ と を prove し た. 3. RuvA - RuvB complex は cross DNA に combining し て, で double sharp DNA in the presence of ATP の を 巻 き も ど し て separation す る activity (Holliday structure specific ヘ リ ケ ス) を も つ こ と を 発 see し た. 4. RuvA - RuvB complex は, rec a タ ン パ ク に よ っ て form さ れ た Holliday tectonic に role し て, ATP decomposition の エ ネ ル ギ ー を using し て Hollidy junctian の mobile さ せ る (branch migration) active を も つ こ と を prove し た. 5. Kind of 々 の tectonic を も つ DNA を made し て, RubC は cross お よ び Y に specific DNA に combining す る が, cutting す る た め に は central の コ ア part に ホ モ ロ ジ ー が entities す る こ と が necessary で あ る こ と が shown さ れ た. 6. RuvC の エ ン ド ヌ ク レ ア ー の ゼ activity to optimum pH 6 ~ 9 で は, 2 価 metal イ オ ン が に must で activity and high concentration の 1 価 の metal salt は resistance against で あ る こ と を Ming ら か に し た.

项目成果

Iwasaki, H.: "Escherichia coli RuvA and RuvB proteins specifically interact with Holliday junctions and promote branch migration." Genes & Dev.6. 2214-2220 (1992)

Iwasaki, H.：“大肠杆菌 RuvA 和 RuvB 蛋白与霍利迪连接体特异性相互作用并促进分支迁移。”

Shinagawa,H.: "SOS-inducible recombination repair genes.Products of ruvA,ruvB,and ruvC genes are Holliday Junction specific enzymes.in Proceedings of 11th International on Photobiology" Elsevier,Amsterdam, 5 (1993)

品川，H.：“SOS 诱导重组修复基因。ruvA、ruvB 和 ruvC 基因的产物是 Holliday Junction 特异性酶。第 11 届国际光生物学会议录”Elsevier，阿姆斯特丹，5 (1993)

Shiba,T.: "Escherichia coli RuvA and RuvB proteins involved in recombination repair. pfysical properties and interactions weth DNA." Mol.Gen.Genet.(1993)

Shiba,T.：“大肠杆菌 RuvA 和 RuvB 蛋白参与重组修复。物理特性和与 DNA 的相互作用。”