DNA組換えにおけるRuvA,B,Cタンパクの機能の解析

RuvA、B、C蛋白在DNA重组中的功能分析

• 批准号: 03267205
• 负责人: 品川 日出夫
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03267205/
• 关键词: ruvA遺伝子; ruvB遺伝子; ruvC遺伝子; Holliday構造; 相同的DNA組換え; DNA修復; polB遺伝子; DNAポリメラ-ゼII

大腸菌のruvA,ruvB,ruvC遺伝子は相同的組換えとDNA損傷の修復に関与していることが知られている。本年度はruvC遺伝子の構造解析と、制御様式を研究した。更にRuvA,RuvB,RuvCタンパクを精製し、相同的DNA組換えの中間体であるHolliday構造の種々のアナログを基質として、反応させ、組換え反応における機能を研究した。1.ruvC遺伝子は19KDaのタンパクをコ-ドし、SOS調節を受けない2つのプロモ-タ-によって転写されることを証明した。(論文3)2.RuvCタンパクを多量に生産させる系を構築し、このタンパクを多量に、しかも高度に精製することができた。(論文4,)3.RuvCは組換え中間体であるHolliday構造を特異的に切断するエンドヌクレア-ゼであることを証明した。(論文4)4.RuvAはDNA結合タンパクで,RuvBはATPase活性をもち、DNAと結合したRuvAはRuvBのもつATPase活性を著しく促進することを証明した。(論文1,2)5.RuvAーRuvB複合体はプラスミド上のInvertedーRepeat領域に形成させた十字型構造を解消させる機能をもつことを発見した。この反応はATPの加水分解を必要とした。この活性は組換え過程での相同な二重鎖DNAの間での単鎖の交換(strandーexchange)反応と同等であると考えられる。(論文1,2)以上の実験結果よりRuvAーRuvBはRecAによって形成されたHolliday構造に特異的に作用して、strandーexchange反応を促進し、RuvCはHolliday構造を分離して組換え反応を完成される機能をもつと考えられる。更に私達は大腸菌のDNAポリメラ-ゼIIの役割を研究したが、この酵素は生体内で、接合による組換え反応には必要ないことを明らかにした。(論文5)

Traces of coliform の ruvA ruvB, ruvC 伝 は son the same group in え と の DNA damage repair に masato and し て い る こ と が know ら れ て い る. Analysis of the structure of the 伝 sub-scale of the <s:1> ruvC this year と and research on the design of the control を た. More に RuvA RuvB, RuvC タ ン パ ク を refined し, the same set of DNA in え の intermediates で あ る Holliday の kind 々 の ア ナ ロ グ を matrix と し て, anti 応 さ せ, group in え anti 応 に お け る function を research し た. 1. RuvC posthumous son 伝 は 19 kda の タ ン パ ク を コ - ド し, SOS adjust を け な い 2 つ の プ ロ モ タ - に よ っ て planning write さ れ る こ と を prove し た. (article 3) 2. RuvC タ ン パ ク を に abundant production さ せ る を build し, こ の タ ン パ ク を に, abundant し か も highly に refined す る こ と が で き た. (article 4), (3) RuvC は group in え intermediates で あ る Holliday tectonic を specific に cut す る エ ン ド ヌ ク レ ア - ゼ で あ る こ と を prove し た. (article 4) 4. RuvA は dna-binding タ ン パ ク で, RuvB は ATPase activity を も ち, DNA と combining し た RuvA は RuvB の も つ ATPase activity を the し く promote す る こ と を prove し た. (article 1, 2) 5. RuvA ー RuvB complex は プ ラ ス ミ ド の on Inverted ー Repeat field に formed さ せ た cross structure を null さ せ る function を も つ こ と を 発 see し た. <s:1> <s:1> reverse 応 ATP <e:1> water decomposition を necessary と た た. こ の は group active in え process で の な same double lock between the DNA の で の 単 lock の exchange (strand ー exchange) against 応 と equal で あ る と exam え ら れ る. (article 1, 2) the above の be 験 results よ り RuvA ー RuvB は rec a に よ っ て form さ れ た Holliday tectonic に specific に role し て, strand ー exchange the 応 を promote し, RuvC は Holliday tectonic を separation し て group in え anti 応 を complete さ れ る function を も つ と え test Youdaoplaceholder0. More に private は coliform の DNA ポ リ メ ラ - cut を ゼ II の service research し た が, こ は の enzyme in vivo で, joint に よ る group in え anti 応 に は necessary な い こ と を Ming ら か に し た. (Paper 5

项目成果

Shinagawa,H.: "SOSーinducible DNA polymerase II of E.coli is homologous to replicative DNA polymerase of eudaryotes." Biochemie. 73. 433-435 (1991)

Shinakawa, H.：“大肠杆菌的 SOS 诱导型 DNA 聚合酶 II 与真生物的复制 DNA 聚合酶同源。” Biochemie 73. 433-435 (1991)

Takahagi,M.: "Molecular analysis of the Escherichia coli ruvC gene,which encodes a Holliday junctionーspecific endonuclease." J.Bacteriol.173. 5747-5753 (1991)

Takahagi, M.：“大肠杆菌 ruvC 基因的分子分析，该基因编码霍利迪连接特异性核酸内切酶。J.Bacteriol.173 (1991)。

Iwasaki,H.: "Escherichia coli RuvC protein is an endonuclease that resolves the Holliday structure." EMBO J.10. 4381-4389 (1991)

Iwasaki, H.：“大肠杆菌 RuvC 蛋白是一种解析 Holliday 结构的核酸内切酶。”

Shinagawa,H.: "Properties of the Escherichia coli RuvA and Ruvb proteins involved in DNA repair,recombination and mutation." Biochemie. 73. 505-507 (1991)

Shinakawa, H.：“大肠杆菌 RuvA 和 Ruvb 蛋白参与 DNA 修复、重组和突变的特性。”

Shiba,T.: "SOSーinduced DNA repair proteins,RuvA and RuvB,of Escherichia coli;Functional interaction between RuvA and RuvB for ATP hydrolysis and renaturation of the cruciform structure in supercoiled DNA." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 88. 8445-8449 (1991)

Shiba, T.：“大肠杆菌的 SOS 诱导的 DNA 修复蛋白 RuvA 和 RuvB；RuvA 和 RuvB 之间对超螺旋 DNA 中十字形结构的 ATP 水解和复性的功能相互作用。” 88.8445-8449（1991）