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DNA組換えにおけるRuvA,B,Cタンパクの機能の解析

RuvA、B、C蛋白在DNA重组中的功能分析

基本信息

批准号：
03267205
负责人：
品川日出夫
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

大腸菌のruvA,ruvB,ruvC遺伝子は相同的組換えとDNA損傷の修復に関与していることが知られている。本年度はruvC遺伝子の構造解析と、制御様式を研究した。更にRuvA,RuvB,RuvCタンパクを精製し、相同的DNA組換えの中間体であるHolliday構造の種々のアナログを基質として、反応させ、組換え反応における機能を研究した。1.ruvC遺伝子は19KDaのタンパクをコ-ドし、SOS調節を受けない2つのプロモ-タ-によって転写されることを証明した。(論文3)2.RuvCタンパクを多量に生産させる系を構築し、このタンパクを多量に、しかも高度に精製することができた。(論文4,)3.RuvCは組換え中間体であるHolliday構造を特異的に切断するエンドヌクレア-ゼであることを証明した。(論文4)4.RuvAはDNA結合タンパクで,RuvBはATPase活性をもち、DNAと結合したRuvAはRuvBのもつATPase活性を著しく促進することを証明した。(論文1,2)5.RuvAーRuvB複合体はプラスミド上のInvertedーRepeat領域に形成させた十字型構造を解消させる機能をもつことを発見した。この反応はATPの加水分解を必要とした。この活性は組換え過程での相同な二重鎖DNAの間での単鎖の交換(strandーexchange)反応と同等であると考えられる。(論文1,2)以上の実験結果よりRuvAーRuvBはRecAによって形成されたHolliday構造に特異的に作用して、strandーexchange反応を促進し、RuvCはHolliday構造を分離して組換え反応を完成される機能をもつと考えられる。更に私達は大腸菌のDNAポリメラ-ゼIIの役割を研究したが、この酵素は生体内で、接合による組換え反応には必要ないことを明らかにした。(論文5)

The ruvA,ruvB,ruvC genes of E. coli are related to DNA damage repair by the same organization. This year, the structural analysis and control methods of ruvC gene are studied. Furthermore, RuvA,RuvB,RuvC were purified, and the same DNA sequence was transformed into an intermediate. The Holliday structure was used to study the function of the substrate, the reverse transformation, and the reverse transformation. 1. The ruvC gene is 19KDa, and SOS regulation is affected. 2. The ruvC gene is 19 KDa. (Paper 3) 2. RuvC is a multi-volume, multi-volume, multi-highly refined system. (Thesis 4,) 3. RuvC is proved to be a special cleavage of Holliday structure in the intermediate. (Paper 4) 4. It was proved that RuvA and RuvB could enhance the ATPase activity by DNA binding and DNA binding respectively. (Thesis 1, 2) 5. RuvA-RuvB complex is the first to form a cross structure on the inverted Repeat domain. ATP hydrolysis is necessary. The activity of the double lock DNA is the same as that of the double lock DNA (Thesis 1, 2) The above results show that RuvA, RuvB, RuvC and Holliday structures are separated from each other, and the Holliday structures are formed by special actions and strand exchange reactions. In addition, it is necessary to study the DNA sequencing of Escherichia coli and the enzyme sequencing in vivo. (Thesis 5)