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エイズ制圧に向けての基礎研究柱1 HIVの分子遺伝学

消除艾滋病的基础研究支柱 1 HIV 的分子遗传学

基本信息

批准号：
04269104
负责人：
畑中正一
金额：
$ 91.14万
依托单位：
Kyoto University (1993-1994)Osaka University (1992)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至 1994
项目状态：
已结题

项目摘要

大腸菌で産生させ精製したHIV-1のGag先駆体p55は、リコンビナントGag(308-406)-Env(512-611)キメラ蛋白や逆転写酵素と同等の反応性を有する優れた高原であった。これらを用いた高感度診断法を確立した。HIV-2のGag蛋白p26と逆転写酵素の多量生産と精製に成功した(品川)。HIV-1とHIV-2には合計5種類のアクセサリー遺伝子がある。我々の開発したシステムによる解析から、これらの遺伝子産物が効果をあらわす時期は、Vif,Vpr,Vpr,Nefが感染初期であり、Vpuが感染後期であることがわかった。また、Gag変異体の解析からGagの機能が感染初期と後期の両方に要求されることも判明した(足立)。組換えワクシニアを用いてEnvとCD4により引き起こされる細胞融合を鋭敏に検出する方法を開発した。β-ガラクトシダーゼのαとω相補を利用するものである。この方法によりサイトカラシンDの阻害効果と、融合に関与する細胞成分の存在を示した(志田)。HIV感染者の体内のHIV-のEnv遺伝子V1領域からV3領域の構造を経時的に解析した。病態の進行した症例では、V3には塩基性荷電が蓄積し、V2には新たな糖鎖付加部位の挿入が認められた。V2の糖鎖付加部位の挿入はV3の塩基性荷電が未だ増加していない症例でも認められた(塩田)。AIDS遺伝子治療に関する基礎的研究として、HIV-1増殖に必須の調節因子Revタンパク質の機能を強力に抑制するRev変異体を作製し、in vitroにおけるこの変異体の抗ウイルス作用を解析した。Rev変異体遺伝子を恒常的に導入したヒト培養細胞ではHIV-1の増殖ならびに細胞障害性が顕著に抑制された(牧、畑中)。

E. coli produces purified HIV-1 Gag precursor p55, Gag(308-406)-Env(512-611) protein, reverse transcriptase and equivalent reverse transcriptase. The high sensitivity diagnostic method was established. HIV-2 Gag protein p26 and reverse transcription enzyme were successfully produced and purified (Shinagawa). HIV-1 and HIV-2 are five types of HIV virus. The development of the virus was analyzed and the gene products were produced during the initial stage of infection, Vif, Vpr,Nef. The analysis of Gag's function varies from the initial stage of infection to the late stage of infection. The method of cell fusion detection was developed.β- This method provides an indication of the presence of cellular components related to the inhibition of fusion and fusion (Shida). Analysis of the structure of HIV-1 domain and V3 domain in HIV infected persons The disease progresses, and V3 is the basic charge accumulation, and V2 is the recognition of the new sugar lock addition site. The basic charge of V2 and V3 did not increase. Basic research related to HIV-1 gene therapy: analysis of the role of Rev-1 gene regulators in suppressing HIV-1 proliferation Rev. The constant introduction of foreign genes into cultured cells inhibits HIV-1 proliferation and cell toxicity.