HIV-1,gag蛋白依存性に活性化される宿主トポイソメラーゼIのはたらき

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これまでの研究によってHIV-1ウイルスの構造蛋白であるgag蛋白がtopoisomerase Iを活性化することを明らかにした。本研究においてはこのgag蛋白による宿主topoisomerase Iの活性化がウイルス複製のどの段階で関わっているかを明らかにすることを目的とした。具体的には以下の方法を取った。1。HIV-1の部分的なゲノムをT7 polymeraseによって産出するプラスミドを構築後、in vitroでRNAを転写しテンプレイトを準備する。2。1。を用いたin vitro逆転写系を準備する。3。2。のin vitro逆転写系において組み替えgag蛋白、topoisomerase I等のもたらす影響を調べる。その結果、両端にLTRを有し中央部gag-pol-envを除去した1本鎖HIV-1 RNAをテンプレートととし、標識したプライマー、市販精製RTを用いた逆転写反応において、GST-p15で活性化されたtopo Iを添加すると、濃度依存的にcDNA生成量が増加した。一方、このcDNA合成量はtopo I阻害剤であるカンプトテシンによって濃度依存的に減少した。本研究ではウイルスgag蛋白と宿主topoIの相互作用について、さらに理解を深めるためにHIV-1 RNAゲノムのin vitro複製モデル系を構築し、活性化topo Iの作用を検討した。その結果topo Iは逆転写効率をウイルスgag蛋白との関連により上昇させることが明らかになり、レトロウイルスの複製に一般化することができる可能性のある機構があきらかとなった。