QBファージRNA複製機構の解析

QB噬菌体RNA复制机制分析

• 批准号: 04271209
• 负责人: 井口 義夫
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Teikyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04271209/
• 关键词: QBレプリカーゼ; β-サブユニット; 保存配列; 宿主因子; RNAポリメラーゼ; リボソーム

抗体の作製が遅れたので、予定していたサブユニット結合部位の解析の代りに、次年度以降に計画していたβ-サブユニット蛋白質の機能領域の解析を開始した。また、新たに宿主因子HF-Iの細胞内機能を検討した。1、抗体の作製:プラスミドpSP18にHF-I遺伝子をクローニングして、同蛋白質を菌体内で大量に産生した。DEAEカラムで精製した後、同蛋白質をウサギに免疫して抗HF-I抗体を得た。一方、プラスミドpMALにβ-サブユニット遺伝子をクローニングして、マルトース結合蛋白質(MBP)との融合蛋白質を菌体内で産生した。アミロースカラムで分離した後、プロテアーゼXaでMBPを切断してβ-サブユニット蛋白質を単離した。現在、抗β-サブユニット抗体を作製中である。2、Qβレプリカーゼ結合都位(S-部位)の構造的特微の解析:S一部位と下流の外被遺伝子領域をM13ファージにクローニングした。しかしながらS一部位に変異があると、変異体レプリカーゼ非産生菌においてもファージ感染後の外被蛋白質合成が起きず、この領域はリボソームの認織に関与していることが推察された。3、β-サブユニット蛋白質の機能領域の解折:変異体レプリカーゼ産生菌の溶菌液を用いて、MDV-1RNAやポリ(C)を鋳型とした試験管内RNA合成を調べた。その結果、保存表列GDD中のグリシン残基は、マグネシウムイオンに依存した触媒活性に関与していることが示唆された。4、宿主因子HF-Iの細胞内生理機能の検討:1で作製した抗HF-I抗体を用いて、同蛋白質の生合成および細胞内分布を調べた。その結果、HF-IはRNAポリメラーゼと同様の生合成制御をうけること、また、主としてリボソーム分画に存在することから、細胞増殖に必須で蛋白生合成に関わる因子であることが推察された。

Antibody の cropping が 遅 れ た の で, designated し て い た サ ブ ユ ニ ッ ト combining site の parsing の generation り に, annual to に plan し て い た beta サ ブ ユ ニ ッ ト の protein の function field analytical を began し た. Youdaoplaceholder0, new たに host factor HF-I intracellular function を検 discussion of <s:1> た. 1, the antibody の cropping: プ ラ ス ミ ド pSP18 に HF - I chose 伝 son を ク ロ ー ニ ン グ し て, with protein を bacteria in vivo で に produce し た. DEAEカラムで is refined to <s:1> た and then immunized with the protein をウサギに to obtain て anti-hF-i antibody を. Party, プ ラ ス ミ ド pMAL に beta サ ブ ユ ニ ッ ト heritage 伝 son を ク ロ ー ニ ン グ し て, マ ル ト ー ス binding protein (MBP) と の fusion protein を bacteria in vivo で produce し た. ア ミ ロ ー ス カ ラ ム し で separation, after た プ ロ テ ア ー ゼ Xa で MBP を cut し て beta サ ブ ユ ニ ッ ト protein を 単 from し た. Currently, the anti-β -サブユニット antibody is を in the process of production である. Beta 2, Q レ プ リ カ ー ゼ combination is a (S) の structure of micro の analytic: S was left outside a place と obscene の 伝 sub-fields を M13 フ ァ ー ジ に ク ロ ー ニ ン グ し た. し か し な が に ら S area - different が あ る と, - variant レ プ リ カ ー ゼ not produce bacteria に お い て も フ ァ ー ジ の after infection by protein synthesis が up き ず, こ の field は リ ボ ソ ー ム の recognize woven に masato and し て い る こ と が push examine さ れ た. 3, beta サ ブ ユ ニ ッ ト protein folding の solution の functional areas: 1 - レ プ リ カ ー の ゼ produce bacteria lysis liquid を with い て RNA や, MDV - 1 ポ リ (C) を type where と し た RNA synthesis test tube を adjustable べ た. そ の results, save table columns in the GDD の グ リ シ ン residues は, マ グ ネ シ ウ ム イ オ ン に dependent し た catalytic activity に masato and し て い る こ と が in stopping さ れ た. 4. Host factor HF-I <s:1> intracellular physiological function <e:1> 検 discussion :1で preparation of <s:1> た anti-hF-i antibody を use of <s:1> て and protein <s:1> biosynthesis および intracellular distribution を regulation べた. そ の results, HF -i は RNA ポ リ メ ラ ー ゼ と with others の biosynthesis suppression を う け る こ と, ま た, main と し て リ ボ ソ ー ム existence painting に す る こ と か ら に must で protein biosynthesis, cell rights colonization に masato わ る factor で あ る こ と が push examine さ れ た.