マンノース6-リン酸非依存性のリソソーム酵素の識別機構

6-磷酸甘露糖非依赖性溶酶体酶的鉴定机制

• 批准号: 05252101
• 负责人: 今井 勝行
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Shimane Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05252101/
• 关键词: グルコセレブロシダーゼ; β-グルコシダーゼ; リソソーム; 選別輸送; 偽遺伝子; cDNA

グルコセレブロシダーゼ/β-グルコシダーゼ(GC)は、マンノース6-燐酸受容体の認識を受けずにリソソームへと移行することが知られているが、その機構は不明である。ツニカマイシン存在下で生合成されたGCが正常に移行することから、選別輸送には糖鎖が関与していないことが予想されている。蛋白質部分を解析するため、ヒト白血病細胞株HL-60からcDNAを単離した所、正常遺伝子の他に、偽遺伝子とされているものが発現していることを見つけ、その構造と各種ヒト細胞株での発現について昨年度、報告した。今年度は、正常(18A)、および偽遺伝子型(12A)のDNAより、各種キメラを作成し、HepG2,WI-38細胞に導入し、その発現について調べた。18Aよりシグナル配列を残し、N末から337塩基を欠失したもの、12Aの対応するN末部分を欠失し、シグナル配列をつないだもの、N末側を正常、C末側を偽遺伝子型としたもの、など五種のDNAを発現ベクターに挿入し、CaPO_4法で導入した。期待通り、正常DNAを導入したものは約2倍の活性を示したが、他のいずれのDNAを導入しても、活性上昇は見られず、また、内因性のGCの活性も影響されなかった。これらキメラDNAが正常遺伝子の発現にも影響しないのか否かについて、他の細胞(COS-1など)においても、導入方法を変えて(リポフェクチン)、ノーザン、ウエスタン法で検討中である。同時に、免疫蛍光染色を行なって、発現蛋白の局在性についても調べている。

The structure of the 6-phosphate receptor is unknown. In the presence of a sugar chain, the GC is normally transported, and the sugar chain is selectively transported. Protein partial analysis of leukemia cell line HL-60 cDNA isolation, normal gene and other genes, pseudo-gene and other genes, and the development of various leukemia cell lines were reported in the past year. This year, normal (18A), pseudo-genotype (12A) DNA, various types of DNA, HepG2,WI-38 cells were introduced, and the development of DNA was regulated. 18A, 12A, 18A, 18A, 12A, 12A, 12 It is expected that normal DNA will be introduced and the activity will increase by about 2 times. The development of DNA as a normal gene is affected by the presence of other cells (COS-1), the introduction method, the application method and the method of gene transfer. At the same time, immunofluorescence staining was performed to detect the presence of protein.

项目成果

Imai,K.et al.: "A novel transcript from a pseudogene for human glucocerebrosidase in non-Gaucher disease cells" Gene. 136. 365-368 (1993)

Imai,K.等人：“非戈谢病细胞中人葡萄糖脑苷脂酶假基因的新转录本”基因。

Hosokawa,Y.et al.: "Cloning and characterization of four types of cDNA encoding myeloperoxidase from human monocytic leukemia cell line SKM-1" Leukemia. 7. 441-445 (1993)

Hosokawa,Y.et al.：“从人单核细胞白血病细胞系 SKM-1 中编码髓过氧化物酶的四种 cDNA 的克隆和表征”白血病。

Morikawa,K.et al.: "Recombinant human IL-5 auguments immunoglobulin generation by human B lymphoblasts in the presence of IL-2" Cell.Immunol.149. 390-401 (1993)

Morikawa, K. 等人：“重组人 IL-5 在 IL-2 存在的情况下增强了人 B 淋巴母细胞的免疫球蛋白生成”Cell.Immunol.149。

Tsuji,S.et al.: "The gene for Machado-Joseph disease maps to human chromosome 14q" Nature Genet.4. 300-304 (1993)

Tsuji,S.et al.：“Machado-Joseph 病的基因映射到人类染色体 14q”Nature Genet.4。

Yamada,M.et al.: "Identification of transcriptional cis-element in intron 7 and 9 of the myeloperoxidase gene" J.Biol.Chem.268. 13479-13485 (1993)

Yamada,M.et al.：“髓过氧化物酶基因内含子 7 和 9 中转录顺式元件的鉴定”J.Biol.Chem.268。