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マンノース6-リン酸非依存性のリソソーム酵素の識別機構

6-磷酸甘露糖非依赖性溶酶体酶的鉴定机制

基本信息

批准号：
04259104
负责人：
今井勝行
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Shimane Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04259104/
关键词：
グルコセレブロシダーゼ β-グルコシダーゼ cDNA 偽遺伝子発現リソソーム

项目摘要

グルコセレブロシダーゼ/β-グルコシダーゼ(GC)はリソソーム膜結合性で、可溶性酵素とは異なり、マンノース6-燐酸受容体に依らないでリソソームへ移行する。GCの選別輸送に関与する構造を知るため、ヒト白血病細胞株HL-60からcDNAをクローニングした。得られた14のクローンはサイズから全長のものと考えられた。しかし、5｀および3｀末端の配列を持つオリゴヌクレオチドをプローブとして調べると、5｀側プローブとは結合しないクローンが見つかった。それぞれのcDNAについて塩基配列を調べたところ、一方は正常遺伝子と同じ配列であったが、他方は意外にも偽遺伝子とされているものに由来していた。その構造はエクソンの一部または全部の欠失、イントロン4からの配列を含むなどの特徴を持つ新しに転写産物であることが判った。この偽遺伝子産物の生理的意味を知るため、他の細胞についても調べた。各種ヒト細胞株、上皮系細胞HeLa,維芽細胞WI38,細胞HepG2および赤芽球系K562,らRNAを調整し、対応するcDNAをPCR法により増幅して解析した。その結果、調べた全ての細胞に広く偽遺伝子型産物が発現していることが分かった。さらに、この偽遺伝子型cDNAを転写して得られるcRNAはin vitroで30kDaの蛋白質を翻訳し得ることが分かった。in vitro翻訳産物はサポニン処理で透過性にしたHepG2とよく結合することも観察された。この結合がGCの選別輸送と関係のある特異的なものなのか検討中である。また、偽遺伝子型転写物がin vivoでも翻訳されるのか、それが正常遺伝子の転写、翻訳になんらかの影響を与えるのか否かについても今後、検討したい。

グルコセレブロシダーゼ/β-グルコシダーゼ(GC)はリソソームmembrane binding properties are not available. Soluble enzyme とはisoなり, マンノース6-dioic acid acceptor に伊らないでリソソームへ migrated する. GC's selection and delivery were carried out with the Hikaru Tectonic Skeleton and the Haze Leukemia Cell Line HL-60 cDNA Hikaru. Get られた14のクローンはサイズから full length のものと卡えられた.しかし、5｀および3｀End arrangement をhold つオリゴヌクレオチドをプローブThe として adjusts the べると, and the 5｀side プローブとは combines the しないクローンが见つかった. The cDNA is the sameじmatching sequence であったが, other side は unexpected にもpseudo legacy 伝子とされているものに origin していた.そのstructuringはエクソンの一一または全の无码、イントロン4からのThe arrangement is composed of a new product, a special product, and a new product. The physiological meaning of the product of このpseudo-relics is を知るため, and the other cells are についても动べた. Various HeLa cell lines, epithelial cell line HeLa, HepG2 cell line WI38, HepG2 HepG2 cell line K562, RNA adjustment, cDNA PCR method, Amplification and analysis. The result of その, the adjustment of べたwhole てのcell に広くpseudo-relic 伝子-type product が発appears していることが分かった.さらに、このpseudogenetic 伝子type cDNAを転WRITEしてgetられるcRNAはin vitroで30kDaのproteinを訳しgetることが分かった. The in vitro translation product, HepG2, has a high permeability and a high permeability.この Combined with GC の selection and transportation と relationship のあるSpecial なものなのか検同中である.また、pseudo-relic 伝子-type 転物がin vivoでもturned訳されるのか、それがnormal 缝子の転WRITTEN、turned訳にThe influence of the なんらかのを and the えるのか不かについても will be the future, and the discussion will be したい.