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非対称標識した脂質小胞を用いた小胞輸送経路での脂質の動態の解析

使用不对称标记的脂质囊泡分析囊泡运输途径中的脂质动力学

基本信息

批准号：
05252201
负责人：
小林俊秀
金额：
$ 0.83万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05252201/
关键词：
小胞輸送脂質輸送膜融合

项目摘要

生体膜では脂質二重層の外層と内層で脂質は非対称に分布しており、一般に糖脂質やホスファチジルコリンはルーメン側(形質膜では外層)に、アミノ基を含むリン脂質であるホスファチジルエタノールアミンやホスファチジルセリンは細胞質側に分布している。小胞輸送は膜の出芽、輸送、融合という一連のステップの組合せであり、これらの反応におけるコートタンパク質の結合やオルガネラの認識はすべて脂質二重層の細胞質側での反応に依存していること、また脂質輸送タンパク質が細胞質に存在していることから細胞質側の脂質の動態に興味が持たれるが、細胞質側の脂質の動態はわかっていない。そこで平成5年度は細胞質側の脂質の動態を知るための実験系の開発を行い、インフルエンザウイルスの膜融合活性を有するタンパク質、ヘマグルチニンを高頻度に細胞表面に発現している3T3細胞を用いて、ヘマグルチニンレセプターである糖脂質依存的に蛍光標識脂質を含む脂質小胞を細胞に融合させることができるようになった。またニトロセルロースフィルターを用いて形質膜を透過性にしたMDCK細胞のゴルジ体に蛍光標識した脂質小胞を融合させ、形質膜への脂質の輸送を追跡する実験も可能になった。このような系で表側あるいは裏側だけを蛍光標識脂質で非体称標識した脂質小胞を細胞に導入しその動態を見る実験は現在進行中だが、膜の表側と裏側では脂質の動態は非常に異なっているという予備的な結果が得られている。平成6年度は平成5年度の研究結果を踏まえ、小胞輸送における脂質の動態を決めている細胞内因子の同定を試みる。このためにバクテリアのトキシンやニトロセルロースフィルターを用いて透過性にした細胞を調製し、蛍光標識脂質をプローブとして用い脂質の動態を制御している細胞質因子の同定を行う。また脂質輸送タンパク質の抗体を用い、動物細胞での脂質輸送タンパク質の小胞輸送と脂質の動態への影響を測定する。

In the outer and inner layers of the lipid bilayer, lipids are distributed asymmetrically in the plasma membrane, and in the cytoplasm. Cell transport is a combination of membrane budding, transport, and fusion. It is understood that lipid transport is dependent on cytoplasmic lipid dynamics in the lipid bilayer. Cytoplasmic lipid dynamics. The development of lipid in cytoplasm was investigated in the fifth year of the study. The membrane fusion activity of lipid in cytoplasm was detected frequently. The lipid in cytoplasm was detected frequently. The lipid in cytoplasm was detected frequently. The membrane of MDCK cells is permeable to light and the lipid transport of MDCK cells can be traced. The membrane surface and the inner surface of the membrane are opposite to each other. The lipid surface and the inner surface of the membrane are opposite to each other. The lipid surface and the inner surface of the membrane are opposite to each other. The results of the study in Heisei 6 and Heisei 5 are as follows: The regulation of cytoplasmic factors in the dynamics of lipid regulation by cell permeability and lipid labeling To determine the effect of antibody on lipid transport and lipid dynamics in animal cells.