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培養海馬ニューロンの膜形成における糖脂質の機能の解析

糖脂在培养海马神经元膜形成中的作用分析

基本信息

批准号：
06267202
负责人：
小林俊秀
金额：
$ 0.83万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06267202/
关键词：
海馬ニューロン糖脂質コレラ毒素 MDCK GM3 GM1

项目摘要

1、海馬ニューロンにおける細胞表面糖脂質の分布と動態東京都臨床総合研究所の田井博士より供与された抗糖脂質モノクローナル抗体を用いてニューロンの分化の際の糖脂質の発現の変化を測定した。その結果ガングリオシドGD3がニューロンの分化の初期に発現し、分化に伴い消失することを見いだした。一方コレラトキシンのBサブユニットの結合で見たガングリオシドGM1はニューロンの分化の進行にかかわらず常に細胞表面に発現していた。蛍光抗体法による実験では他のガングリオシドであるGM3,GT1b,GD1bの発現は見られなかった。GM1はニューロンの軸索にも樹状突起/細胞体にも分布していたことから、金コロイドで標識したコレラ毒素を調整し、樹状突起と軸索での動きを高感度ビデオカメラを用いて顕微鏡下で観察した。その結果GM1は軸索ドメインでも樹状突起ドメインでも非常に遅い拡散をしていることがわかった。2、培養上皮細胞におけるGM3の細胞内分布ニューロンの膜形成機構の理解のヒントを得る目的でニューロン同様極性を有している上皮細胞の膜形成に関しても研究を行なっている。培養上皮細胞であるMDCK細胞は先端面と側底面の二つの形質膜を有しており、糖脂質は主として先端面に濃縮されていると言われているが、詳細な検討は行なわれていない。MDCKの主要糖脂質であるGM3に体するモノクローナル抗体を用いてGM3の細胞表面での分布を測定した。メンブレンフィルターに生育させたMDCK細胞は上側を先端面、下側を側底面と配向して配列する。先端面と側底面はタイトジャンクションによって仕切られている。このような細胞は上側からは抗GM3抗体によって間接蛍光抗体法により染色されるが下側からは染色されなかった。またカバーグラス上に生育させたMDCK細胞を抗GM3抗体を用いて染色すると先端面に特徴的な斑点状の染色パターンを示したが、培地からカルシウムを除いてタイトジャンクションをはずすと側底面も染色された。これらの結果はGM3は先端面に局在しており、局在化にはタイトジャンクションが必要であることを示している。

1. The distribution and dynamics of glycolipid on the cell surface of hippocampus during the differentiation of hippocampus was measured by Dr. Tai of Tokyo Institute of Clinical Research. As a result, the initial stage of differentiation of GD3 appeared, and the middle stage of differentiation disappeared. The cell surface of a single cell is often found in the process of differentiation. GM3, GT1b, GD1b were discovered in the light antibody method. GM1 has a high sensitivity to the distribution of dendrites/cell bodies in the axons. The result is that GM1 has an axis and a tree. 2. To study the intracellular distribution of GM3 in cultured epithelial cells and the mechanism of membrane formation. Cultured epithelial cells contain two types of plasma membrane on the surface of the first side, glucose and lipid, and concentrated on the surface of the first side. The distribution of GM3 on the surface of MDCK cells was determined using antibodies against GM3. MDCK cells are aligned on the upper side and on the lower side The first side of the bottom surface of the first side of the first side of the first The upper part of the cell is stained with anti-GM3 antibody and the lower part of the cell is stained with indirect fluorescent antibody. The MDCK cells were stained with anti-GM3 antibodies, and the characteristic spots were stained with anti-GM3 antibodies. The result is that GM3 is in the process of being transformed into a complete system.