血管平滑筋の収縮弛緩調節機序

调节血管平滑肌收缩和舒张的机制

• 批准号: 05256230
• 负责人: 小川 靖雄
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05256230/
• 关键词: 平滑筋; 収縮制御; ミオシン軽鎖キナーゼ; カルモジュリン; 超沈殿; りん酸化レベル

平滑筋の収縮弛緩調節機序についてはミオシン軽鎖キナーゼMLCKによるミオシン軽鎖LCのりん酸化による説が有力であるが、これだけでは説明され得ない実験結果も報告されており、再検討の気運にある。我々はニワトリ砂のうより収縮系および調節系蛋白を調節し、同一標本で収縮活性(超沈殿法で行う)とLCりん酸化レベル(二次元電気泳動法による移動度の相違より評価)とを同時に測定しながら検討を行った。Ca^<2+>感受性のある筋原線維を0.6MKClで可溶化、0.25MKClにして沈降させる方法により洗浄すると分子量〜140kDaのバンドが特異的に抜け出て、脱感作アクトミオシンが生じる。〜140kDa蛋白はカルモジュリン依存性にCa^<2+>感受性を賦与し、所謂MLCKと同一であることを見出した。その根拠はi.電気泳動時の移動度が同一であること、ii.既報の方法で調製したMLCKと生物活性が同一であること、iii精製〜140kDaのトリプシン限定分解物のアミノ酸配列がMLCKにも見出されたことなどである(計画3)。脱感作アクトミオシンよりアクチン、ミオシン、トロポミオシンを電気泳動的に単一バンドにまで精製し、別途に精製したMLCK、カルモジュリンを用いて再構成実験を行った(計画2)。ミオシン重鎖の含量が天然アクトミオシンと同一となるように配慮した。生物活性は加えるアクチン含量に依存し、モル比にして少なくともミオシン含量の3倍以上のアクチンが必要であった。細胞内条件に近い20倍のアクチン存在ではトロポミオシンがなくてもCa^<2+>依存性の超沈殿、りん酸化いずれもみられるが、トロポミオシン存在下の方が超沈殿速度が速かった。再構成系の場合、到達吸光度増加分が脱感作アクトミオシン系の場合の1/2-1/3であった。超沈殿活性とりん酸化レベルとは概ね平行しているが、りん酸化レベルはMLCKの酵素活性のほかにアクチン-ミオシン相互作用の程度により変化することがわかった(計画1)。これらの原因については今後検討しなければならない。なお脳底動脈スキンドファイバーでも、大動脈スキンドファイバーで得られたのと同一の結果を得た(計画4)。

The smooth muscle contraction relaxation regulation mechanism is described in detail in the report and the operation is discussed in detail. We also determined the activity of the protein in the same sample (ultra-sedimentation method) and the activity of the protein in the same sample (two-dimensional electrokinetic method). Ca^<2+> sensitivity of the original trace dimension of 0.6M KCl solubilization, 0.25M KCl precipitation method for washing, molecular weight of ~ 140kDa of the protein, specific reaction, desensitization of the protein to produce. ~ 140kDa protein is dependent on Ca^<2+> susceptibility, so-called MLCK and identity. The results show that: i. mobility of MLCK during electrokinetic migration is the same; ii. reported method of modulation is the same; iii. purification of ~ 140kDa of MLCK is the same; and iii. acid alignment of MLCK is the same. De-sensitization, de-sensitization, de-sensitization, de- The content of the compound is naturally different from that of the compound. Biological activity depends on the amount of protein, and it is necessary to increase the amount of protein by more than 3 times. In the presence of nearly 20-fold intracellular conditions, the super-sinking velocity increases rapidly under Ca^<2+>-dependent conditions. When the system is re-formed, the absorbance increases and the desensitization is 1/2-1/3 of the system. The enzyme activity of MLCK was determined by the degree of interaction between MLCK and MLCK (Project 1). The reason for this is that the future is not the same. The results of the study were the same as those of the previous study (plan 4).

项目成果

Morimoto,S.and Ogawa,Y.: "Nechanism of Ca^<2+> independent tesion development of skinned rabbit aortic smooth muscie after ADP treatment at acidic pH" J.Muscle Res.Cell Motil.14. 368 (1993)

Morimoto,S. 和 Okawa,Y.：“酸性 pH 值下 ADP 处理后，剥皮兔主动脉平滑肌 Ca^2 独立张力发育的机制”J.Muscle Res.Cell Motil.14。

Sato,O.and Ogawa,Y.: "Re-examination of regulatory mechanism of smooth muscle contraction." Jpn.J.Pharmacol.(in press). (1994)

Sato,O. 和 Okawa,Y.：“平滑肌收缩调节机制的重新检查。”