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高分子量ストレス蛋白質の構造と機能

高分子量应激蛋白的结构和功能

基本信息

批准号：
05268237
负责人：
畑山巧
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kyoto Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05268237/
关键词：
ストレス蛋白質 hsp105 哺乳動物細胞

项目摘要

マウスFM3A細胞の高分子量ストレス蛋白質hsp105に対する抗体を作成し、その細胞内局在性を検討したところ、マウス細胞においてhsp105は正常時や熱ショック時においても主に細胞質に局在し、核小体には局在しないことが明らかとなった(投稿中)。この結果は、Subjeckらにより報告されているマウス細胞の高分子量ストレス蛋白質hsp110が正常時及び熱ショック時にも核小体に局在するという報告と異なるので、この違いを明らかにするため、次に哺乳動物細胞の高分子量ストレス蛋白質の分子種を検討した。その結果、ヒトHeLa及びマウスFM3A細胞において、分子量約105kDa付近に正常時にも産生されているが、熱ショックにより合成と細胞内量の増加する2種のストレス蛋白質(hsp105A、hsp105B)の存在が明らかとなった。これらのストレス蛋白質を精製するため、42℃の加温したFM3A細胞の抽出液をDEAE-Sepharose、Hydroxylapatite、ゲル濾過カラムクロマトグラフィーをおこなったところ、hsp105A、hsp105Bと共に、我々が既に報告している42℃加温で特異的に誘導されるストレス蛋白質(42℃-hspA、42℃-hspB)が挙動を同じくするため、さらにこれらの蛋白質をSDS-PAGEにより分離し、電気泳動的に溶出して単一に精製した。これら4種のストレス蛋白質のN末端アミノ酸はブロックされていたので、これらのストレス蛋白質をlysyl-endopeptidase消化すると、hsp105A、hsp105B、42℃-hspA、及び42℃-hspBに共通して17,000-Daのペプチド断片が存在した。これらのペプチド断片のN末端アミノ酸配列を調べると、それらは互いに共通であり、hsp70やアクチンのATP結合ドメインと相同性を示すことが明らかとなった(投稿中)。これらの一群の高分子量ストレス蛋白質ファミリー(hsp105A、hsp105B、42℃-hspA、及び42℃-hspB)の構造と機能をさらに明らかにするため、現在、hsp105や42℃-hspのcDNAクローニングをおこなっている。

The high molecular weight protein of the FM3A cell, the hsp105 protein, the antibody, the high molecular weight protein, the hsp105 antibody, the antibody, the cell, the cell (in the contribution). The results of the test, the Subjeck report, the high molecular weight protein, the high molecular weight protein. The results showed that there were significant differences in the results, the HeLa and the molecular weight of FM3A, the molecular weight of hsp105A and hsp105B, and the molecular weight of the two kinds of proteins (hsp105A, hsp105B). After heating at 42 ℃, the extract of FM3A cell was extracted, DEAE-Sepharose, Hydroxylapatite, hsp105A, hsp105B, we both reported that the temperature was heated at 42 ℃, the temperature was 42 ℃, and the temperature was 42 ℃. The protein was separated by SDS-PAGE chromatography and the electrophoretic digestion assay was used to improve the precision. The N-terminal amino acids of four kinds of proteins were isolated and purified. The fragments were isolated from lysyl-endopeptidase digestion, hsp105A, hsp105B, 42 ℃-hspA, and 42 ℃-hspB. The fragments are connected with each other in the n-terminal region. The data are common to each other, and the hsp70 are connected to the ATP to show that they are identical (in contribution). A group of high molecular weight high molecular weight proteins (hsp105A, hsp105B, 42 ℃-hspA, and 42 ℃-hspB) can be used in the production of high molecular weight proteins (hsp105A, hsp105B, 42 ℃-hspA, and 42 ℃-hspB). The current, high molecular weight, high molecular weight, high molecular weight