高分子量ストレス蛋白質の構造と機能

1,マウスの高分子量ストレス蛋白質HSP105と42℃加温によってのみ誘導される42℃特異的ストレス蛋白質(42℃-HSP)の構造を明らかにするため,42℃加温したFM3A細胞のpoly(A)+RNAで作成したcDNAライブラリーを抗マウスHSP105抗体でスクリーニングし、2つの全長cDNAクローン(pB105-1,pB105-2)を分離した。pB105-1は858アミノ酸を、pB105-2はpB105-1から44アミノ酸を欠いた814アミノ酸をコードしていた。2,pB105-1およびpB105-2各々のin vitro transcription/translation産物はSDS-PAGEでそれぞれHSP105および42℃-HSPと同じ位置に泳動された。3,pB105-1をプローブとして用いたNorthern blot法により、FM3A細胞に約4kヌクレオチドのRNA転写産物が検出され、熱ショックと亜砒酸、およびアミノ酸アナローグ処理により強く誘導された。4,RT-PCR法を、pB105-2において欠損する132ヌクレオチドを検出できるプライマーを用いておこなうと、pB105-2産物は42℃加温においてのみ増加したが、pB105-1産物は42℃と45℃の熱ショック、また他のストレスによっても増加した。以上の結果からpB105-1とpB105-2はそれぞれHSP105と42℃-HSPに相当すると考えられた。5,蛋白質ホモロジー検索により,マウスHSP105がヒトBリンパ球に特異的なHSP70RY(54%)、ウニ卵子の精子受容体(34%)、およびマウス誘導型HSP70(25%)と高い相同性をもつことが明らかとなった。6,HSP105mRNAはマウスの種々の臓器、特に脳に強く発現していた。

1,マウスの高分子量ストレス蛋白質HSP105と42℃加温によってのみ誘導される42℃特異的ストレス蛋白質(42℃-HSP)の構造を明らかにするため,42℃加温したFM3A細胞のpoly(A)+RNAで作成したcDNAライブラリーを抗マウスHSP105抗体でスクリーニングし、2つの全長cDNAクローン(pB105-1,pB105-2)を分離した。pB105-1は858アミノ酸を、pB105-2はpB105-1から44アミノ酸を欠いた814アミノ酸をコードしていた。2,pB105-1およびpB105-2各々のin vitro transcription/translation産物はSDS-PAGEでそれぞれHSP105および42℃-HSPと同じ位置に泳動された。3,pB105-1をプローブとして用いたNorthern blot法により、FM3A細胞に約4kヌクレオチドのRNA転写産物が検出され、熱ショックと亜砒酸、およびアミノ酸アナローグ処理により強く誘導された。4,RT-PCR法を、pB105-2において欠損する132ヌクレオチドを検出できるプライマーを用いておこなうと、pB105-2産物は42℃加温においてのみ増加したが、pB105-1産物は42℃と45℃の熱ショック、また他のストレスによっても増加した。以上の結果からpB105-1とpB105-2はそれぞれHSP105と42℃-HSPに相当すると考えられた。5,蛋白質ホモロジー検索により,マウスHSP105がヒトBリンパ球に特異的なHSP70RY(54%)、ウニ卵子の精子受容体(34%)、およびマウス誘導型HSP70(25%)と高い相同性をもつことが明らかとなった。6,HSP105mRNAはマウスの種々の臓器、特に脳に強く発現していた。