高分子量ストレス蛋白質の構造と機能

高分子量应激蛋白的结构和功能

• 批准号: 07253226
• 负责人: 畑山 巧
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kyoto Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07253226/
• 关键词: ストレス蛋白質; 熱ショック蛋白質; HSP105; cDNAクローニング; FM3A細胞

1,マウスの高分子量ストレス蛋白質HSP105と42℃加温によってのみ誘導される42℃特異的ストレス蛋白質(42℃-HSP)の構造を明らかにするため,42℃加温したFM3A細胞のpoly(A)+RNAで作成したcDNAライブラリーを抗マウスHSP105抗体でスクリーニングし、2つの全長cDNAクローン(pB105-1,pB105-2)を分離した。pB105-1は858アミノ酸を、pB105-2はpB105-1から44アミノ酸を欠いた814アミノ酸をコードしていた。2,pB105-1およびpB105-2各々のin vitro transcription/translation産物はSDS-PAGEでそれぞれHSP105および42℃-HSPと同じ位置に泳動された。3,pB105-1をプローブとして用いたNorthern blot法により、FM3A細胞に約4kヌクレオチドのRNA転写産物が検出され、熱ショックと亜砒酸、およびアミノ酸アナローグ処理により強く誘導された。4,RT-PCR法を、pB105-2において欠損する132ヌクレオチドを検出できるプライマーを用いておこなうと、pB105-2産物は42℃加温においてのみ増加したが、pB105-1産物は42℃と45℃の熱ショック、また他のストレスによっても増加した。以上の結果からpB105-1とpB105-2はそれぞれHSP105と42℃-HSPに相当すると考えられた。5,蛋白質ホモロジー検索により,マウスHSP105がヒトBリンパ球に特異的なHSP70RY(54%)、ウニ卵子の精子受容体(34%)、およびマウス誘導型HSP70(25%)と高い相同性をもつことが明らかとなった。6,HSP105mRNAはマウスの種々の臓器、特に脳に強く発現していた。

1, マ ウ ス の high molecular weight ス ト レ ス protein HSP105 と 42 ℃ heating に よ っ て の み induced さ れ る 42 ℃ specific ス ト レ ス protein (42 ℃ - HSP) の tectonic を Ming ら か に す る た め, 42 ℃ heating し た FM3A cells の poly real (A) + RNA で made し た cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を resistance マ ウ ス HSP105 antibody で ス ク リ ー ニ ン グ し, 2 つ の full-length cDNA ク ロ ー ン (pB105 - pB105-1, 2) separation を し た. は pB105-1 858 ア ミ ノ acid を, pB105-2 は pB105-1 か ら 44 ア ミ ノ acid を owe い た 814 ア ミ ノ acid を コ ー ド し て い た. 2, pB105 1 お よ び pB105-2 each 々 の in vitro transcription/translation product は sds-page で そ れ ぞ れ HSP105 お よ び 42 ℃ - bathing with HSP と じ position に さ れ た. 3, pB105 1 を プ ロ ー ブ と し て in い た Northern blot method に よ り, FM3A cell に about 4 k ヌ ク レ オ チ ド の RNA product planning write が 検 out さ れ, hot シ ョ ッ ク と 亜 arsenic acid, お よ び ア ミ ノ acid ア ナ ロ ー グ 処 Richard に よ り strong く induced さ れ た. 4, rt-pcr method を, pB105-2 に お い て owe loss す る 132 ヌ ク レ オ チ ド を 検 out で き る プ ラ イ マ ー を with い て お こ な う と, 2 product は pB105-42 ℃ heating に お い て の み raised plus し た が, 1 product は pB105-42 ℃ と 45 ℃ の hot シ ョ ッ ク, ま た he の ス ト レ ス に よ っ て も Add た た. の above results か ら pB105-1 と pB105-2 は そ れ ぞ れ HSP105 と 42 ℃ - HSP に す る と exam え ら れ た. 5, protein ホ モ ロ ジ ー 検 cable に よ り, マ ウ ス HSP105 が ヒ ト B リ ン パ ball に specific な HSP70RY (54%), ウ ニ eggs の sperm by capacity (34%), お よ び マ ウ ス type induced HSP70 (25%), high と い identity を も つ こ と が Ming ら か と な っ た. 6. HSP105mRNA ウス ウス <s:1> species 々 calucous organs, particularly に脳に strong く occurrence of <s:1> て て た た た た.

项目成果

Takumi Hatayama: "Inhibition mechanism of HSP70 induction in murine FM3A cells maintained at low culture temperature." Biochim. Biophys. Acta. 1269. 243-252 (1995)

Takumi Hatayama：“维持在低培养温度下的小鼠 FM3A 细胞中 HSP70 诱导的抑制机制。”

Kunihiko Yasuda: "Cloning and expression of murine high molecular mass heat shock proteins, HSP105." J. Biol. Chem.270. 29718-29723 (1995)

Kunihiko Yasuda：“鼠类高分子热休克蛋白 HSP105 的克隆和表达。”

Takumi Hatayama: "Thermosensitization of murine FM3A cells by transient incubation at low culture temperatures." J. Radiat. Res.36. 248-257 (1995)

Takumi Hatayama：“通过在低培养温度下瞬时孵育来实现小鼠 FM3A 细胞的热敏化。”