ミスマッチ認識および修復過程の生化学的研究

错配识别和修复过程的生化研究

• 批准号: 09269220
• 负责人: 秋山 昌広
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09269220/
• 关键词: ミスマッチ修復; 枯草菌; 自然突然変異

枯草菌ゲノムプロジェクトによりmutS遺伝子が見いだされたので、PCR法によりDNA断片を増幅しmutS遺伝子をクローン化した。クローン化したmutS遺伝子は全塩基配列を決定し、PCRエラーを含まないことを確認した。枯草菌mutS遺伝子をT7プロモーターの制御下におき、大腸菌内で分子量97,500ダルトンの枯草菌MutS蛋白質を大量に発現させた。その遺伝子産物をリゾチーム処理、硫安沈殿、Heparin Sepharoseカラム、MonoQカラムによってほぼ単一標品に精製した。枯草菌MutS蛋白質を精製するためのアッセイ系としては、^<32>Pでラベルしたミスペアを含む二本鎖DNA基質(Heteroduplex)によるゲルモビリティシフト法を用いた。枯草菌MutS蛋白質によるミスペア認識の特異性を解析するため、精製標品を用いて枯草菌MutS蛋白質はHeteroduplexに特異的に結合することを明らかにした。その中でも特にトランジション型の変異、一部のトランスバ-ジョン型の変異、さらに1〜2塩基のループ構造等のミスペアを特異的に認識する活性をもっていた。MgCl_2非存在下でもミスペアを認識することができるが、ATP存在下ではその活性はかなり低下した。また、枯草菌MutS蛋白質とHeteroduplexとの相互作用を解析するためにATPase活性を測定した。その結果、Heteroduplex、ミスペアを含まない二本鎖DNA基質(Homoduplex)、一本鎖DNA基質、DNA基質なしの順でATPase活性が低下した。

Bacillus subtilis was divided into mutS fragments, mutS fragments and mutS fragments. Make sure that the full base column is determined, and that the mutS column contains a confirmation column, and the PCR column contains a confirmation column. The molecular weight of mutS was 97500, the molecular weight of Bacillus subtilis was 97500, the MutS protein of Bacillus subtilis was high, and a large number of proteins were detected. You need to know what you want to know. You need to know how to use it. You know, Heparin Sepharose, Heparin Sepharose, and MonoQ. You know, everything. The MutS protein of Bacillus subtilis has been isolated from different parts of the world. The protein of Bacillus subtilis has been isolated from a non-traditional university called DNA (Heteroduplex). The protein has been used in a variety of ways. The MutS protein of Bacillus subtilis was analyzed by the combination of the protein of Bacillus subtilis MutS protein and the Heteroduplex protein of Bacillus subtilis. There is a lot of knowledge about how to make a special phone call, such as the production of a special phone, a car, a car, a car In the presence of MgCl_2, there is no significant difference between the two. In the presence of ATP, there is a significant increase in activity. The interaction of MutS protein of Bacillus subtilis and Bacillus subtilis was analyzed. The activity of ATPase was determined. The results showed that the results of Heteroduplex, the number of samples from ordinary universities, the base of DNA (Homoduplex), the basis of DNA, and the activity of ATPase in ordinary universities were lower than those of other universities.