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発作性夜間血色素尿症の分子病態学

阵发性睡眠性血红蛋白尿症的分子病理学

基本信息

批准号：
09271218
负责人：
木下タロウ
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

発作性夜間血色素尿症(PNH)は、異常造血幹細胞クローンが拡大し多数のGPIアンカー欠損血球を末梢に供給することにより発症する。PIG-Aのミュータントが正常細胞を圧倒して拡大するメカニズムを解明するためマウスの相同遺伝子Pig-aをコンディショナルにノックアウトしたPNHモデルマウスを作製した。X染色体上のPig-a遺伝子のエクソン6をはさむようにloxP配列を挿入したES細胞を確立した。(以下loxPを含むPig-aをPig-a^<flox>と記す)。このES細胞を用いてPig-a^<flox>を持つマウスの系を確立した。ヒトサイトメガロウイルスプロモーターでCreを発現するトランスジェニックマウスの雌とPig-a^<flox>マウスの雄をを交配し胎児を得た。Creトランスジーンを持つ雌胎児はPig-a^<flox>をヘテロにもっている。胎児全DNAを解析すると、ほぼ完全にPig-a^<flox>遺伝子内でのリコンビネーションにより遺伝子破壊が起こっていた。すなわち全身の細胞で父由来のPig-aが欠損、母由来のPig-aが正常のヘテロになっていた。これにX染色体の不活化が加わっているので全身でGPIアンカー欠損細胞と正常細胞のモザイクとなっていると予想された。14日目の胎児肝の赤血球上のGPIアンカー型タンパク質の発現を見ると半数以上の赤血球が欠損細胞であった。この肝細胞からTER陰性細胞を集め、致死量照射した成体マウスに移植した。移植後6週毎に末梢血細胞上のGPIアンカー型タンパク質の発現を調べた。6週から36週にわたって、赤血球、単球、顆粒球、CD4、CD8リンパ球、Bリンパ球にGPIアンカー型タンパク質欠損の細胞集団が存在した。すなわちこれらのマウスはGPIアンカー型タンパク質欠損の多能性造血幹細胞を持っていることがわかった。観察中にGPIアンカー型タンパク質欠損細胞の割合が増加した個体は出現しなかった。以上から、この手法によりPNH発症の第一ステップを備えたモデルマウスを安定に多数作製できることがわかった。

Progressive nocturnal hemochromaturia (PNH) is a disease characterized by abnormal hematopoietic stem cell populations and a large number of GPI deficient blood cell endings. PIG-A is the same gene as PIG-A, which is the same gene as PIG-A. Pig-a gene on X chromosome was cloned into ES cells. (The following loxP includes Pig-a<flox>). This ES cell line was established using Pig-a^<flox>. The female and the male of the female are mated and the fetus is born<flox>. Cre de la femme et de la femme et de la <flox>femme Complete DNA analysis of the fetus, complete analysis of the Pig-a gene, complete analysis of the Pig-a gene<flox>, The cells of the whole body are damaged from the Pig-a of the father, and normal from the Pig-a of the mother. The X chromosome is not activated, but the whole body is GPI damaged cells and normal cells. On the 14th, more than half of the fetal liver erythrocytes were damaged. The liver cells were collected and the lethal dose was used for transplantation. 6 weeks after transplantation, the expression of GPI in peripheral blood cells was modulated. From 6 weeks to 36 weeks, there were poor cell populations of erythrocytes, lymphocytes, granulocytes, CD4, CD8, CD9, CD9, The stem cells are called pluripotent hematopoietic stem cells. In the study, GPI was observed to increase the number of cells with poor quality and to increase the number of individuals. The above is the first step in the development of PNH.