発作性夜間血色素尿症の分子病態

阵发性睡眠性血红蛋白尿症的分子病理学

• 批准号: 08282224
• 负责人: 木下 タロウ
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08282224/
• 关键词: 発作性夜間血色素尿症; 造血幹細胞; ジーンターゲティング; モデル動物; GPIアンカー

発作性夜間血色素尿症(以下PNHと略す)は、PIG-A遺伝子に体細胞突然変異を持つ異常な造血幹細胞クローンが拡大し、多数のGPIアンカー欠損血球を抹消に供与することにより発症する。PIG-Aのマウス相同遺伝子Pig-aを欠損したES細胞を用いて作ったキメラマウスの解析から、異常クローンの拡大には、PIG-Aの変異以外に第2の要因があることが示唆されていた。しかし、キメラマウスの中に生後1年後から異常血液細胞の拡大を起こした個体が出現した。本研究では、この現象を再現し第2の要因がPig-a欠損の造血幹細胞自体に起こるのか、骨髄環境に起こるのかを区別し、2つの要因とクローン性拡大の関係を明らかにすることを目的とする。通常の手法でキメラマウスをつくろうとすると、強い致死性のため低キメリズムの個体が少数得られるだけであった。安定に多数のキメラを作るためコンディショナル遺伝子ターゲティングの手法を用いた。まず、X染色体上のPig-a遺伝子のエクソン6をはさむようにlox P配列を挿入したマウスの系統を確立した。このマウスの雄とヒトサイトメガロウイルスプロモーターでCreを発現するトランジェニックマウスの雌を交配し胎児を得た。14日目の肝の赤血球は半数以上がGPI欠損であったので、造血幹細胞を含む細胞画分を、致死量照射したマウスに移植した。6週後末梢血を調べると各血液系にGPI欠損細胞が存在していた。すなわち胎児肝中にGPI欠損造血幹細胞が存在し、移植によって血液系キメラマウスができることがわかった。これらのキメラはPNH発症の第1要因を備えたマウスであり、第2の要因の解析に応用していく予定である。

Progressive nocturnal hemoglobinuria (PNH) is characterized by sudden changes in the PIG-A gene and persistent abnormalities in hematopoietic stem cells. Most of the GPI gene is deficient in blood cell depletion. PIG-A is the same gene as PIG-A, which is the second important cause of ES cell failure. One year after birth, abnormal blood cells appear in large individuals. This study shows that this phenomenon is reproduced in the second place due to differences in the origin of Pig-a deficiency in hematopoietic stem cells and bone environment. Usually, the method of death is very low, and the individual is very rare. The stability of the majority of the game, the game. The Pig-a gene on the X chromosome was found to be a gene that could be inserted into the genome. The male and female of the female are born. On the 14th, more than half of the red blood cells in the liver were damaged by GPI, and the hematopoietic stem cells were transplanted with lethal dose. After 6 weeks, the peripheral blood cells were regulated and the GPI deficient cells were found in all blood lines. Hematopoietic stem cells with GPI deficiency exist in fetal liver and are transplanted into the blood system. The first essential cause of PNH syndrome is prepared, and the second essential cause is analyzed.

项目成果

Jun-ichi Nishimura et al.: "A patient with paroxysmal nocturnal hemoglobinuria bearing four independent PIG-A mutant clones." Blood. (in press).

Jun-ichi Nishimura 等人：“一名患有阵发性睡眠性血红蛋白尿症的患者携带四个独立的 PIG-A 突变克隆。”

Taroh Kinoshita: "Protection of host from its own complement by membrane-bound complement inhibitors:C3 convertase inhibitors vs membrane attack complex inhibitors." Research in Immunology. 147・2. 100-103 (1996)

Taroh Kinoshita：“膜结合补体抑制剂保护宿主免受自身补体的影响：C3 转化酶抑制剂与膜攻击复合物抑制剂。”免疫学研究 147・2（1996）。

Reika Watanabe et al.: "PIG-A and PIG-H,which participate in glycosyl phosphatidyl-inositol anchor biosynthesis,from a protein complex in the endoplasmic reticulum." Journal of Biological Chemistry. 271・43. 26868-26875 (1996)

Reika Watanabe 等：“PIG-A 和 PIG-H，参与内质网中蛋白质复合物的糖基磷脂酰肌醇锚定生物合成。”《生物化学杂志》271·43 (1996)。