HIV転写に要求されるtRNA^<Lys3>の構造とその遺伝子発現制御分子としての応用

HIV转录所需的tRNA^<Lys3>的结构及其作为基因表达控制分子的应用

• 批准号: 09278223
• 负责人: 高久 洋
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Chiba Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09278223/
• 关键词: レトロウイルスプライマー; tRNA^<Lys3>; 変異tRNA^<Lys3>; vRNA; 逆転写酵素; PBS配列; cDNA

レトロウイルスは遺伝子RNAを細胞内に取り込まれ、自らの逆転写酵素(RT)を使ってDNAに逆転写され、細胞の染色体に挿入される。この際にtRNA^<Lys3>がDNA合成のプライマーとして要求される。しかし、tRNA^<Lys3>の構造がどの様にcDNAの合成に影響を与えるかは明らかにされていないので、本研究では逆転写反応に要求されるtRNA3^<Lys>の構造、vRNAとtRNA^<Lys3>、あるいは核タンパク質(NCp7)との相互関係を解明する。さらにこの結果を基に変異tRNA^<Lys3>をデコイとして用い、エイズウイルスの増殖阻害を検討する。はじめに、tRNA^<Lys3>のD-ループ、アンチコドン、T-ループ部位に変異を導入した変異tRNA^<Lys3>を構築するとともにNCp7の合成を遂行し成功した。上記で構築したプライマーを用いてHIV-1のvRNA、PBS/U5に相当するvRNAテンプレート上、cDNAの合成を検討した。DNAプライマー(18mer)を用いた場合は、濃度依存的にcDNA合成効率が上昇した。一方、tRNA^<Lys3>をプライマーとして用いた際には、DNAプライマーと比較したところ、その転写効率は高いものであった。また、テンプレート側の影響を検討した。vRNAのU5部位のPBS、プライマー結合部分までの長さをもつテンプレートとさらに3'-側に延長した鎖長を有するvRNAテンプレートと比較したところ、PBS配列より3'-側に鎖長を延長したテンプレートを用いた際により効率が良いcDNA合成が確認されたことから、tRNA^<Lys3>はそのプライマーとしての機能を発揮するには、PBS部位に結合するばかりか、3'-側テンプレートとの相互作用も要求されることがわかった。

The gene RNA is extracted from the cell, reverse transcriptase (RT) is used to reverse transcriptase DNA, and the chromosome is inserted into the cell. This time tRNA is required for <Lys3>DNA synthesis. The <Lys3>structure of tRNA3 and tRNA4 affect the synthesis of cDNA. In this study, the relationship between the structure of tRNA3 and tRNA4 and the <Lys>structure of tRNA4 <Lys3>and tRNA4 is clarified. The results of this study are as follows<Lys3>: In <Lys3>addition, different tRNAs were introduced into the D-IP, Anaconda, and T-IP sites of tRNAs, and the synthesis of <Lys3>NCp7 was successfully carried out. In this paper, we discuss the construction and application of HIV-1 vRNA, PBS/U5 vRNA and cDNA. DNA synthesis efficiency increases in concentration dependent cases. A party of tRNA<Lys3>The influence of the weather on the environment is discussed. The length of the PBS, tRNA, and binding portion of the U5 site is longer than the length of the 3 '-side lock. The length of the PBS, 3'-side <Lys3>lock is longer than the length of the PBS.

项目成果

Kazumi Hosono: "Cleavage effect of oligonucleotides substituted at the cleavage sites with modified pyrimidine-and purine-nucleosides" Biochim.Biophys.Acta. 1354. 211-218 (1997)

Kazumi Hosono：“在切割位点用修饰的嘧啶和嘌呤核苷取代的寡核苷酸的切割效果”Biochim.Biophys.Acta。

高久 洋: "AIDSのアンチセンス核酸療法(BIO Industry)" C.M.C., 10 (1997)

Hiroshi Takaku：“艾滋病的反义核酸疗法（BIO 工业）”C.M.C.，10（1997）

Insil Kim: "NMR analysis of the hydrogen bonding interactions of the RNA-binding domains of the Drosophila Sex-lethal protein with target RNA fragments with site-specific [3-^<15>N]uridine substitutions." Nucleic Acids Res.25. 1565-1569 (1997)

Insil Kim：“对果蝇性致死蛋白的 RNA 结合域与具有位点特异性 [3-^ 15 N]尿苷取代的目标 RNA 片段之间的氢键相互作用进行核磁共振分析。”

Hiromi Shirakura: "Study on site specific cleavage of RNA" Nucleic Acids Res.Symp.Ser.37. 217-218 (1997)

Hiromi Shirakura：“RNA 位点特异性切割的研究”核酸 Res.Symp.Ser.37。

Kaoru Ushijima: "Site specific cleavage of tRNA by imidazole and/or primary amine groups bound at the 5'-end of oligodeoxyribonucleotides" Biochim.Biophys.Acta. (in press).

Kaoru Ushijima：“寡脱氧核糖核苷酸 5 端结合的咪唑和/或伯胺基团对 tRNA 进行位点特异性切割”Biochim.Biophys.Acta。