抗HIV活性をもつ機能性アンチセンスDNAの合成とその作用機序

具有抗HIV活性的功能性反义DNA的合成及其作用机制

• 批准号: 05262102
• 负责人: 高久 洋
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Chiba Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05262102/
• 关键词: アンチセンスDNA; AIDSウイルス; アンチセンスDNAの作用機序; 抗HIV活性; 逆転者酵素

抗HIV剤としてのアンチセンスDNA効果を発揮させる一つの手段としてHIVmRNA上での塩基配列の選択がある。そこで昨年度までrev、tatのスプライシングアセプター、翻訳部位、さらには、pol,gagもよいターゲットとなることを明かにしてきた。本年度はtat蛋白質が結合し発現を促進するtarのバジル構造に対応するアンチセンスDNAを構築したが予期に反しRNA二重鎖形成部位が高い活性を示した。また、rev蛋白質が結合するRREのバルジループ構造に対応するアンチセンスDNAもより高い活性を有することが明かとなった。一方、実際にアンチセンスDNAがmRNA上に結合して遺伝子発現を阻害しているかが問題点として現在残っており、この作用機序を解明するために新しいシステムの開発をおこないHIV遺伝子発現阻害機構の解明に成功した。すなわち、天然に存在するDNAはAMV、MMLV依存の逆転写酵素との相互作用はなくmRNA上に結合して遺伝子発現阻害機能を発揮していることが明かにした。ところが、アンチセンスDNAとして最も期待されているホスホロチオエート型のDNAはこれらの逆転写酵素強く相互作用をすることがわかった。しかし、HIV依存の逆転者酵素とホスホロチオエート型のDNAは全く相互作用することなくmRNA上に結合して遺伝子の発現を阻害していることが我々の実験によりはじめて明かにされた。これらの結果から、アンチセンスDNA、特にホスホロチオエート型は抗HIV剤として高い機能を発揮するものと期待される。

A new approach to the development of HIV resistant DNA gene fragments and the selection of gene sequences on HIV mRNA In the past year, the rev, tat and the position of the department have been changed. This year, tat protein binding was promoted, and DNA construction was expected to be highly active at RNA double lock formation sites. The protein binding mechanism of RRE was discussed. In this paper, we try to understand the mechanism of HIV gene expression inhibition by combining DNA with mRNA and explaining the mechanism of HIV gene expression inhibition. The interaction of AMV and MMLV dependent reverse transcription enzymes with DNA that exists naturally and binds to mRNA to inhibit the expression of genes The DNA of the reverse transcription enzyme interacts with each other. HIV-dependent reverse transcriptase enzymes interact with each other completely, binding to mRNA and inhibiting the expression of genes. The results of this study are as follows:

项目成果

Toshifumi Hatta: "Mechanism of the Inhibition of Reverse Travscription by Uumodified and Modified Antisense Oligonucleotides" FEBS Lett.330. 161-164 (1993)

Toshifumi Hatta：“Uummodified 和 Modified 反义寡核苷酸抑制反向转录的机制”FEBS Lett.330。

Sug-Gug Kim: "Anti-HIV Activities and Physicochemical Properties of Phosphorothioate Analogues Complemntary to HIV Sequenoes" Bicorg.Med.Chem.Lett.3. 1223-1228 (1993)

Sug-Gug Kim：“与 HIV 序列互补的硫代磷酸酯类似物的抗 HIV 活性和理化特性”Bicorg.Med.Chem.Lett.3。

Masamitsu Shimada: "Specificity of Priming Reaction of HIV-1 Reverse Transcriptase,2〓-OH or 3〓-OH" J.Biol.Chem.(in press). (1994)

Masamitsu Shimada：“HIV-1 逆转录酶，2〓-OH 或 3〓-OH 引发反应的特异性”J.Biol.Chem.（出版中）。

Kentarou Nagai: "Characterizations and Bilogical Activity of 8-Substituted Analogues of 2〓,5〓-Oligoadenylates" Biochem.Biophys.Acta. 1156. 312-326 (1993)

Kentarou Nagai：“2〓,5〓-寡腺苷酸的 8-取代类似物的表征和生物活性”Biochem.Biophys.Acta。1156. 312-326 (1993)

Satoru Tsukahara: "Inhibition of Restriction Enzyme Ksp 632-I Via Triple Formation by Phosphorothioate Oligonucleotides" Nucleosides & Nucleotides. (in press). (1994)

Satoru Tsukahara：“硫代磷酸酯寡核苷酸通过三重形成抑制限制性酶 Ksp 632-I”