マウス初期胚におけるmRNA情報の変化とその制御

小鼠早期胚胎mRNA信息变化及其调控

• 批准号: 09278225
• 负责人: 木村 穣
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: Tokai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09278225/
• 关键词: SSEC-D; マウス; 初期胚; 遺伝子発現; 母性RNA; 転写後調節; 接合子型RNA

平成9年度は計画に従って研究が実施されたが,新しい発見により項目2,3,4より5に重点を置いた研究を行った.1.SSEC-D全長cDNAの単離.ほぼ全長のcDNAをマウス胚性幹細胞のcDNAライブラリーより単離した.125アミノ酸をコードする領域は予測できるが,ペプチドのモチーフは見いだされず機能は未知である.2.抗体の作成と抗体を用いたタンパク質発現解析.本年度は抗体作成の為に種々のcDNA断片を結合し,大腸菌で目的のタンパク質を発現する系を確立した.3.3'-UTR領域に結合するタンパク質の単離.酵母のtwo-hybrid systemの基礎固めを行った.4.RNA注入による発現解析.in vitroで合成した大腸菌βgal遺伝子との融合RNAを受精前後のマウス卵に注入を行った結果,接続するSSEC-D RNAの部分により,βgalの活性に違いがあるようであったが,この実験系は定量性,RNAの安定性等に問題があることに気づいた.5.SSEC-D RNAの受精に伴う変化(1)SSEC-D RNAは受精後15時間前後に一過性に伸長するが,このSSEC-D maternal RNAは2細胞期後期頃から再び短縮,分解することが判明した.これは検出感度の改良を行った結果,30個程度の受精卵の全RNAを用いてNorthern Blottingが実施できるようになったことによる.(2)この伸長は3'末端へのA-richな配列の付加によることを証明し,(3)この伸長,短縮,分解の過程が,受精後に起こる新たなDNA複製やmRNA合成を必要としない自律的な変化であることを明かにした.このSSEC-D RNAの動態は,マウス受精卵における母性RNAから接合子型RNAへの転換に深く関わる一般的な現象と見ており,今後この自律的プログラムを分子レベルで明かにすることが重要である.

In 2009, the SSEC-D full-length cDNA was isolated. The full-length cDNA of embryonic stem cells was isolated from the cDNA library. 125 amino acids were used in the domain prediction. 2. Antibody production. This year, antibodies were produced to bind cDNA fragments of the species, and the system for the production of target proteins in Escherichia coli was established. 4. RNA injection analysis of yeast two-hybrid system.In vitro synthesis of E. coli beta gal gene and fusion RNA before and after fertilization. Results of DNA injection in vitro, followed by partial DNA synthesis of SSEC-D RNA, beta gal activity was detected quantitatively. There are many problems with the stability of RNA.5. Fertilization of SSEC-D RNA is accompanied by changes.(1) SSEC-D RNA temporarily elongates around 15 hours after fertilization, and this SSEC-D maternal RNA has been shortened and decomposed from the late 2-cell stage. The results of Northern Blotting showed that 30 levels of total RNA from fertilized eggs were used. (2)The elongation, shortening, and decomposition of the 3'-terminal DNA sequence are demonstrated.(3) DNA replication and mRNA synthesis are necessary after fertilization. The dynamics of SSEC-D RNA is closely related to the general phenomenon of zygote DNA translocation, and the molecular evolution of the future self-regulating RNA translocation is important.