マウス初期胚母性RNAの時期特異的ポリ(A)鎖伸長の意義

小鼠早期胚胎母体RNA阶段特异性多聚A链延长的意义

• 批准号: 12029221
• 负责人: 木村 穣
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tokai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12029221/
• 关键词: マウス; 着床前初期胚; 卵形成; 受精卵; 母性RNA; 接合型遺伝子発現; poly(A)化; 翻訳制御

受精前後で発現する遺伝子群の研究の過程で単離した新規遺伝子のSSEC-D cDNA(stage specific embryonic clone-D)の解析から、その母性mRNAは1細胞期後期(受精後18時間)をピークとして一過的にmRNAのポリA鎖を伸長させていることと、この伸長には未知のcis配列が利用されていることを見いだした。マウスでは受精後ポリ(A)鎖を伸長する母性RNAの報告は無い。本研究の目的は、我々が見いだした受精後に生じる母性RNAのポリ(A)鎖伸長現象が、マウス初期胚発生プログラムにいかに関与するかを解明することである。本年度、この伸長に関わる未知のcis配列の同定に向け、EGFPcDNAおよび各鎖長のポリ(A)を持つ一連の融合SSEC-DRNAをマウス受精卵細胞質へ注入する実験を行い、幾つかの知見を得た。先ず、注入RNAは受精卵に本来存在するSSEC-D母性RNAと同様にRNA伸長を示し、注入実験系をほぼ確立できた。この系を駆使し、受精後に生じる母性RNAのポリA鎖伸長現象には、(i)SSEC-D配列および45ntds以上の3′末端のpoly(A)鎖の存在が必要であること。(ii)特定のSSEC-D配列の欠損したRNA注入実験から、SSEC-DのRNA配列中の特定の配列に依存していることを示した。さらに、3末端のpoly(A)鎖とSSEC-DのRNA配列中の特定の配列がRNA安定性に関与することを見いだし、EGFPの注入胚での発現から、3′末端のpoly(A)鎖の存在、もしくはpoly(A)鎖の伸長が翻訳活性への影響する可能性が認められた。これらの一連の結果から、ダイナミックな変動を示す母性型SSECDmRNAの動態に関するRNAシスシグナルおよびトランス因子の同定のための研究へ進展させるための足がかりが出来たと考える。

The analysis of SSEC-D cDNA(stage specific embryonic clone-D) and maternal mRNA in the study of gene subgroups before and after fertilization were carried out at the late cell stage (18 hours after fertilization). The female RNA was not detected after fertilization. The purpose of this study was to clarify the relationship between maternal RNA fragmentation and early embryo development after fertilization. This year, we have obtained information about the development of a sequence of fused SSEC-DRNA and the cytoplasmic injection of fertilized eggs, such as the alignment of unknown cis sequences, EGFP cDNA sequences and the alignment of individual locks (A). SSEC-D maternal RNA and RNA elongation were established when RNA was injected into the fertilized egg. This phenomenon is related to the presence of poly(A) locks at the 3′ end of SSEC-D alignment above 45ntds. (ii)RNA injection for specific SSEC-D alignment defects and RNA alignment dependencies for specific SSEC-D alignment are shown. In addition, the presence of poly(A) locks at the 3 'end and the possibility of elongation of poly (A) locks affecting RNA stability were also identified. The results of this study show that there is no difference between the expression of mRNA and the expression of DNA.

项目成果

Kajiwara,K., et al.: "Sez4 gene encoding an elongation subunit of DNA polymerase zeta is required for normal embyogenesis"Genes to Cells (2001). (in press).

Kajiwara,K., et al.：“正常胚胎发生需要编码 DNA 聚合酶 zeta 延伸亚基的 Sez4 基因”Genes to Cells (2001)。

Sadahiro,S., et al: "Morphometric Analysis of the Myelin-Associated Oligodendrocyte Basic Protein-Deficient Mouse Reveals a Possible Role for Myelin-Associated Oligodendrocytis Basic Protein in Reguiating Axonal Diameter"Neuroscience. 98. 361-367 (2000)

Sadahiro,S. 等人：“髓磷脂相关少突胶质细胞碱性蛋白缺陷型小鼠的形态测量分析揭示了髓磷脂相关少突胶质细胞碱性蛋白在调节轴突直径中的可能作用”神经科学。

Sato,M. et al.: "New Approach to Cell Lineage Analysis in Mammals Using Cre-loxP System."Molecular Reproduction and Fertility. 56. 34-44 (2000)

佐藤，M.

M.Sato,T. et al.: "Enhanced green fluorescent protein as a useful tag for rapid identification of homozygous transgenic mice."Genetic Anal : Biomol. Engineer.(2000). (in press).

佐藤先生，T.

M.Sato, et al.: "Enhanced green fluorescent prote (EGFP) as a useful tag for identification of homozygous transgenic embryos."J.Reprod.Engineer.. 3. 124-133 (2000)

M.Sato 等人：“增强型绿色荧光蛋白 (EGFP) 作为鉴定纯合转基因胚胎的有用标签。”J.Reprod.Engineer.. 3. 124-133 (2000)