权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

血管平滑筋細胞における転写因子Idの機能と発現調節機序

转录因子Id在血管平滑肌细胞中的功能及表达调控机制

基本信息

批准号：
09281208
负责人：
倉林正彦
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09281208/
关键词：
動脈硬化 Id Rb Sp1 CREB Cキナーゼバルーン傷害平滑筋細胞

项目摘要

【目的】動脈硬化病変の成因として、多数の細胞増殖因子による、血管平滑筋細胞の活性化が重要である。ヘリックスループヘリックスの構造をもつ転写調節因子Id2は、細胞周期の調節に重要なRbの遺伝子産物の機能を抑制し、細胞の増殖を促進する。そこで、血管平滑筋細胞の増殖機構を明らかにする目的で、Id2遺伝子の転写調節機序を解析した。【方法】ヒトId2遺伝子をクローン化し、ラット大動脈の培養血管平滑筋細胞へのトランスフェクションにより、プロモーター活性に重要なシスエレメント、およびトランス因子について解析した。また、ゲルシフトアッセイ法により、DNA結合蛋白の解析を行った。ラットのバルーン傷害モデルを作成し、免疫組織染色により、Id2の発現を検討した。【結果】転写開始部位より1.3kbの5'隣接領域をLUCに連結したプラスミドのプロモーター活性は、血清およびCキナーゼを直接的に活性化するフォルボールエステル(PMA)により増加した。転写開始点から-150と+30の領域が血清およびPMAに対するプロモーター活性の増加に重要であった。血清およびPMAにて刺激した細胞から抽出した核蛋白では、無刺激のそれに比較し、Sp-1,CREB/ATFのDNA結合活性が明らかに増加した。また、酵母の転写因子Ga14のDNA結合ドメイン(DBD)とSp-1の融合蛋白を発現するベクターによる標的レポータープラスミドのプロモーター活性の増加は、PMA刺激によって有意に増加した。ラットのバルーン傷害モデルにて、Id2は新生内膜に著明に発現が検出された。【考察】バルーン傷害および培養血管平滑筋細胞の血清およびPMA刺激にて、Id2の発現が増加した。血清およびPMA刺激はId2プロモーターを活性化した。この機序には、Sp-1およびCREB/ATFのDNA結合活性の増加が重要である。Sp-1は構成的な遺伝子発現のみでなく、増殖刺激に対する遺伝子発現の誘導においても機能する。

[Objective] The cause of atherosclerosis, most cell growth factors, vascular smooth muscle cell activation is important. The structure of the cell cycle is regulated by the regulatory factor Id2, which inhibits the function of Rb gene products and promotes cell proliferation. The aim of this study is to analyze the regulatory mechanism of vascular smooth muscle cells. [Method] The analysis of the important factors in the activity of cultured vascular smooth muscle cells from the aorta was carried out by using the method of "Id2" gene. Analysis of DNA binding proteins in human genome The results of immunologic staining and detection of Id2 were analyzed. [Results] The activity of the 5'contiguous region of the 1.3kb site where the writing started was increased by linking to LUC, and the activity of the 5' contiguous region where the writing started was increased by linking to LUC. The increase in activity in the region from-150 to +30 is important for serum and PMA. The DNA binding activity of Sp-1,CREB/ATF increased significantly when compared with that of non-stimulated cells. In addition, yeast DNA binding protein (DBD) and Sp-1 fusion protein expression target protein activity increased under PMA stimulation. Id2 is found in the neointima. [Investigation] The development of Id2 in cultured vascular smooth muscle cells increased due to PMA stimulation. Serum PMA Stimulus Id2 Activation The increase in DNA binding activity of Sp-1 and CREB/ATF is important. Sp-1 is a component of the gene expression and induction function in response to reproductive stimulation.