転写因子による血管新生とその抑制の分子機構の解明

阐明血管生成及其转录因子抑制的分子机制

基本信息

批准号：
10177202
负责人：
倉林正彦
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10177202/
关键词：
CARP リモデリングプロモーター TGFβ Smad バルーン傷害

项目摘要

【目的】CARPは心筋細胞、血管平滑筋細胞、血管内皮細胞に特異的に発現する。本研究では、血管系細胞における遺伝子応答における、CARPの役割を明らかにし、血管リモデリングの分子機構を解析する。【方法】ラットバルーン傷害後に形成される新生内膜にCARPが発現するか否か免疫染色にて検討した。ウサギ大動脈由来の血管平滑筋細胞C2/2細胞を用いて、各種生理活性物質による発現変化をノーザンブロットにより検討した。ヒトCARP遺伝子のプロモーター領域をルシフェラーゼベクターに接続したプラスミドを作成し、C2/2細胞にトランスフェクトすることによりCARPプロモーターの活性調節機序を解析した。また、TGFβによる細胞内情報伝達分子として重要なSmadによるCARPの発現調節について、SmadとのコトランスフェクションによるCARPプロモーター活性の変化を指標として解析した。TGFβのtypeI受容体の恒常型活性型ミュータントT204DとのコトランスフェクションによるCARPのプロモーター活性の変化を検討した。【結果】CARPはバルーン傷害後に形成される新生内膜に強く誘導された。C2/2細胞において細胞増殖を抑制するTGFβは、CARPmRNAの発現を用量依存的に、経時的に増加させた。また、TGFβはCARPのプロモーター活性を増加させた。Smad3の過剰発現はCARPプロモーター活性を増加させた。さらにTGFβのtypeI受容体の恒常型活性型ミュータントT204DはCARPプロモーター活性を増加させた。【考察】CARPは心筋細胞に非常に豊富に存在する校内蛋白であるが、バルーン傷害後に形成される新生内膜中の血管平滑筋細胞にも発現が誘導された。また、C2/2細胞においてTGFβはCARPの遺伝子発現を転写レベルで誘導し、その過程にSmad3が関与した。CARPはTGFβによる細胞内情報伝達経路でSmadの下流に位置し、TGFβシグナリングのメディエーターとして機能している可能性がある。

目的：鲤鱼在心肌细胞，血管平滑肌细胞和血管内皮细胞中特别表达。在这项研究中，我们将阐明鲤鱼在血管细胞中基因反应中的作用，并分析血管重塑的分子机制。方法：通过免疫染色检查了大鼠球囊损伤后形成的新内膜鲤鱼。使用源自兔主动脉的血管平滑肌细胞C2/2细胞，通过Northern印迹检查了由各种生理活性物质引起的表达变化。创建了质粒，其中人鲤鱼基因的启动子区域连接到荧光素酶载体并转染到C2/2细胞中，以分析鲤鱼启动子的活性调节机制。此外，使用TGFβ的细胞内信号分子对CARP的表达调节，使用carp启动子活性的变化分析了与SMAD作为指数的转化。我们研究了TGFβ与稳态活性突变体T204D共转染后鲤鱼活性的变化。结果：在球囊受伤后形成的新内膜中，鲤鱼是强烈诱导的。抑制C2/2细胞中细胞增殖的TGFβ随着时间的推移以剂量依赖性方式增加了鲤鱼mRNA的表达。此外，TGFβ增加了鲤鱼的启动子活性。 SMAD3的过表达增加了鲤鱼启动子活性。此外，稳态活跃的突变体T204D是TGFβ的I型受体，增加了腕启动子活性。 [讨论]鲤鱼是一种在心肌细胞中非常丰富的学校蛋白质，但其表达也被诱导在新内膜的血管平滑肌细胞中，在球囊损伤后形成。在C2/2细胞中，TGFβ在转录水平上诱导鲤鱼基因的表达，而SMAD3参与了此过程。鲤鱼位于TGFβ的细胞内信号传导途径中SMAD的下游，并且可能充当TGFβ信号传导的介体。