転写因子による血管新生とその抑制の分子機構の解明

阐明血管生成及其转录因子抑制的分子机制

• 批准号: 10177202
• 负责人: 倉林 正彦
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10177202/
• 关键词: CARP; リモデリング; プロモーター; TGFβ; Smad; バルーン傷害

【目的】CARPは心筋細胞、血管平滑筋細胞、血管内皮細胞に特異的に発現する。本研究では、血管系細胞における遺伝子応答における、CARPの役割を明らかにし、血管リモデリングの分子機構を解析する。【方法】ラットバルーン傷害後に形成される新生内膜にCARPが発現するか否か免疫染色にて検討した。ウサギ大動脈由来の血管平滑筋細胞C2/2細胞を用いて、各種生理活性物質による発現変化をノーザンブロットにより検討した。ヒトCARP遺伝子のプロモーター領域をルシフェラーゼベクターに接続したプラスミドを作成し、C2/2細胞にトランスフェクトすることによりCARPプロモーターの活性調節機序を解析した。また、TGFβによる細胞内情報伝達分子として重要なSmadによるCARPの発現調節について、SmadとのコトランスフェクションによるCARPプロモーター活性の変化を指標として解析した。TGFβのtypeI受容体の恒常型活性型ミュータントT204DとのコトランスフェクションによるCARPのプロモーター活性の変化を検討した。【結果】CARPはバルーン傷害後に形成される新生内膜に強く誘導された。C2/2細胞において細胞増殖を抑制するTGFβは、CARPmRNAの発現を用量依存的に、経時的に増加させた。また、TGFβはCARPのプロモーター活性を増加させた。Smad3の過剰発現はCARPプロモーター活性を増加させた。さらにTGFβのtypeI受容体の恒常型活性型ミュータントT204DはCARPプロモーター活性を増加させた。【考察】CARPは心筋細胞に非常に豊富に存在する校内蛋白であるが、バルーン傷害後に形成される新生内膜中の血管平滑筋細胞にも発現が誘導された。また、C2/2細胞においてTGFβはCARPの遺伝子発現を転写レベルで誘導し、その過程にSmad3が関与した。CARPはTGFβによる細胞内情報伝達経路でSmadの下流に位置し、TGFβシグナリングのメディエーターとして機能している可能性がある。

【 Objective 】CARP に specific に occurrence する in cardiac muscle cells, vascular smooth muscle cells and vascular endothelial cells. This study で は, vascular cells に お け る posthumous son 伝 応 answer に お け る, CARP の "を cut Ming ら か に し, blood vessels, リ モ デ リ ン グ の molecular institutions を parsing す る. 【 Method 】ラットバ <s:1> に After に injury, に forms される neointima にCARPが occurs する に no immunostaining にて検 to recover た. ウ サ ギ artery origin の vascular smooth muscle cells C2/2 を with い て, all kinds of physiological active substances に よ る 発 now - the を ノ ー ザ ン ブ ロ ッ ト に よ り beg し 検 た. ヒ ト CARP heritage 伝 son の プ ロ モ ー タ ー field を ル シ フ ェ ラ ー ゼ ベ ク タ ー に meet 続 し た プ ラ ス ミ ド を make し, C2/2 cells に ト ラ ン ス フ ェ ク ト す る こ と に よ り CARP プ ロ モ ー タ ー の active conditioner sequence analytical し を た. ま た, TGF beta に よ る intelligence 伝 of molecules in cells と し て important な Smad に よ る CARP の 発 now adjust に つ い て, Smad と の コ ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン に よ る CARP プ ロ モ ー タ の ー activity - the を index と し て parsing し た. TGF beta の typeI by let body の constant reactive type ミ ュ ー タ ン ト T204D と の コ ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン に よ る CARP の プ ロ モ ー タ の ー activity - the を beg し 検 た. 【 Result 】CARP に バ <s:1> バ に injury に に formation される neointima に strong く induction された C2/2 cells に お い て を inhibit cell raised colonization す る TGF beta は, CARPmRNA の 発 now を dosage dependent に, 経 に raised plus さ せ た. The activities of また, TGFβ プロモ, CARP, プロモ, プロモ and タ を increase させた. Smad3 has shown <s:1> CARPプロモ タ タ タ activity を increased させた. さ ら に TGF beta の typeI by let body の constant reactive type ミ ュ ー タ ン ト T204D は CARP プ ロ モ ー タ ー active を raised plus さ せ た. [investigation] CARP は heart muscle cells に very に aboundant に exist す る campus protein で あ る が, バ ル ー ン damage に formed after さ れ る neointimal の in vascular smooth muscle cell に も 発 now が induced さ れ た. ま た, C2/2 cells に お い て TGF beta は CARP の posthumous son 伝 発 を now planning to write レ ベ ル で induced し, そ の process に Smad3 が masato and し た. CARP は TGF beta に よ る intelligence 伝 in cells of 経 road で Smad の obscene し に position, TGF beta シ グ ナ リ ン グ の メ デ ィ エ ー タ ー と し て function し て い る possibility が あ る.

项目成果

Saito Y.et.al.: "Klotho Protein Protects against Endothelial Dysfunction" Biochem.Biophys.Res.Commun.248. 324-329 (1998)

Saito Y.et.al.：“Klotho 蛋白可预防内皮功能障碍”Biochem.Biophys.Res.Commun.248。

Ohyama Y.et.al.: "Molecular Cloning of Rat Klotho cDNA:Markedly decreased Expression of Klotho by Acute Inflammatory Stress" Biochem.Biophys.Res.Commun.251. 920-925 (1998)

Ohyama Y.et.al.：“大鼠 Klotho cDNA 的分子克隆：急性炎症应激显着降低 Klotho 的表达”Biochem.Biophys.Res.Commun.251。

倉林雅彦・永井良三: "細胞工学:動脈硬化はどうやって起こるのか" 秀潤社, 288 (1999)

Masahiko Kurabayashi 和 Ryozo Nagai：“细胞工程：动脉硬化是如何发生的？”288 (1999)

Kurabayashi M.et.al.: "Down-regulation of angiotensin II receptor type I in heart failure" Circulation. 9. 1104-1107 (1996)

Kurabayashi M.et.al.：“心力衰竭中 I 型血管紧张素 II 受体的下调”循环。

Suzuki T.et.al: "Preferential differentiation of P19 mouse embryonal carcinoma cells into smooth muscle cells" Circulation. 93. 1244-1249 (1996)

Suzuki T.et.al：“P19小鼠胚胎癌细胞优先分化为平滑肌细胞”循环。