マクロファージにおけるPPARγを介する動脈硬化関連遺伝子の発現抑制機構の解明

阐明巨噬细胞中PPARγ抑制动脉粥样硬化相关基因表达的机制

基本信息

批准号：
13877101
负责人：
倉林正彦
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

動脈硬化の発症と進展において単球からマクロファージへの変換は重要である。血管内皮を通り抜け、周囲のサイトカインによってマクロファージに変換することによって、酸化LDLを貪食し、泡沫細胞にさらに変換することによって、脂質に富む不安定プラークの形成へと繋がる。本研究においては、ヒト単球性白血病細胞THP-1細胞を用いて、単球からマクロファージへの変換の分子機構を解析した。THP-1細胞はホルボールエステルにて刺激することによって48時間以内にマクロファージに変換する。この過程でマクロファージに特異的な遺伝子の一つであるオステオポンチンが誘導された。オステオポンチンは、細胞外マトリックス蛋白であり、動脈硬化を促進する作用をもつ。オステオポンチン遺伝子のプロモーター活性は、単球からマクロファージへの変換に伴って増加した。また、この増加は、PPARγリガンドであるトログリタゾンによって著明に抑制された。オステオポンチンプロモーターコンストラクトとPPARγの発現ベクターとの共トランスフェクションによってプロモーター活性は抑制された。この抑制には、プロモーター部位で-990の部位に存在するA/T-に富む配列が重要であった。この配列には、PPARγは結合せず、ホメオボックス蛋白が結合した。また、ゲルシフトアッセイにて、この配列を認識する核蛋白は、マクロファージへの変換に伴って誘導される蛋白であることが判明した。このホメオボックス蛋白はマクロファージへの変換過程に機能する可能性があり、現在、その蛋白をコードする遺伝子のクローニングを行っている。

单核细胞向巨噬细胞的转化对于动脉硬化的发展和发展很重要。通过穿过血管内皮并通过周围的细胞因子将其转化为巨噬细胞，它可以吞噬氧化的LDL并进一步将其转化为泡沫细胞，从而导致形成富含脂质的，不稳定的斑块。在这项研究中，使用人单核细胞到美核细胞THP-1细胞分析了单核细胞转化为巨噬细胞的分子机制。通过用佛波尔酯刺激THP-1细胞在48小时内转化为巨噬细胞。在此过程中，诱导了巨噬细胞特异性基因之一的骨桥蛋白。骨桥蛋白是一种细胞外基质蛋白，具有促进动脉硬化的作用。骨桥蛋白基因的启动子活性随单核细胞向巨噬细胞的转化而增加。 PPARγ配体troglitazone也明显抑制了这种增加。通过与PPARγ表达载体的骨桥蛋白启动子构建体共转染抑制启动子活性。启动子位点的位点-990中存在的富含A/T的序列对于这种抑制很重要。该序列不与PPARγ结合，而与同型蛋白质结合。此外，在凝胶转移测定中，发现识别该序列的核蛋白是由转化为巨噬细胞诱导的蛋白质。该同源蛋白可能在转化为巨噬细胞的过程中起作用，并且目前正在经过编码蛋白质的基因克隆。