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新しい細胞外基質蛋白del-1の血管構築における機能の研究

新型细胞外基质蛋白del-1在血管构建中的作用研究

基本信息

批准号：
09281235
负责人：
川名正敏
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokyo Women's Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09281235/
关键词：
血管新生細胞外基質インテグリン分子生物学

项目摘要

心血管系の発生過程は極めて複雑で、血管の発生様式にはvasculogenesisとangiogenesisの2通りがあることが知られているが、何が発生様式を決定しどのような機序で成人の循環系が出来上がるのかについては未だ不明の点が多い。我々はレポータ遺伝子のrandom insertionによるenhancer trap法を利用し、胎児血管内皮細胞で発現する新しい遺伝子“del-1"を単離した。このdel-1のcDNAは480アミノ酸残基からなり、5'末端にはシグナルペプタイドを認め、N末端の3つの上皮細胞増殖因子(EGF)繰り返し配列とC末端の2つのdiscoidin様ドメインから構成される新しい蛋白であった。さらに2番目のEGF配列の中にインテグリン結合配列(RGD)が認められた。In situ hybridizationでは心内膜、血管内皮細胞に強いdel-1 mRNAの発現が見られ、抗del-1抗体による免疫組織染色では、血管では内皮細胞下に、心臓では心内膜下層にdel-1が検出された。即ちdel-1は胎生期に内皮細胞で産生されたのち分泌されて細胞外基質に存在することが明らかになった。血島由来の未分化内皮細胞のcell lineであるyolk sac cell(YS cell)を用いてin vitroでの機能解析を行った。YS cellは通常4-5日でネットワーク・管腔形成を起こすのに対し、del-1蛋白をコートしたdish上でYS cellを培養するとこれが全く起こらなかった。従ってdel-1は内皮から分泌された後に細胞外基質に存在して、RGD配列を介して内皮細胞膜上のintegrin αVβ3と結合して細胞内に情報を伝達し、angiogenesisを抑制する蛋白質と考えられる。

The development process of cardiovascular system is extremely complex, and the development mode of blood vessels is opposite to vasculogenesis and angiogenesis. We use random insertion to enhance trap method to develop new gene "del-1" in fetal vascular endothelial cells The cDNA of del-1 contains 480 amino acid residues, 3 amino acid residues at the 5'terminus, 3 amino acid residues at the N terminus, and 2 amino acid residues at the C terminus. In addition, the EGF alignment of the two sub-items is recognized as the combination alignment (RGD). In situ hybridization, del-1 mRNA was detected in endocardial and vascular endothelial cells, and anti-del-1 antibodies were detected in immunostaining, vascular endothelial cells, and cardiac subendocardial cells. That is to say, the endothelial cells in the fetal stage produce and secrete the extracellular matrix. Cell line analysis of undifferentiated endothelial cells (YS cells) derived from blood islands YS cells usually grow on 4-5 days, and lumen formation starts on 4 - 5 days. The expression of protein del-1 in the extracellular matrix after endothelial secretion, RGD alignment, integrin αVβ3 binding on endothelial cell membrane, intracellular information transmission, angiogenesis inhibition and protein expression.