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ヒト白血病ウイルスにおけるスプライシングの制御機構

人类白血病病毒剪接的控制机制

基本信息

批准号：
02238204
负责人：
志田壽利
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02238204/
关键词：
HTLVーI スプライシング Rex

项目摘要

ヒト成人T細胞白血病ウイルス(HTLVーI)のRex蛋白質の作用機構を解明するために.RexとsnRNPとの関係を調べた。i)各種抗snRNP抗体(SLE患者血清、単クロ-ン抗体、アフィニティ-精製抗体)を用いて、免疫沈降を行なったところ、抗U1RNP抗体がRexを共沈させた。このことは、U1RNPとRexとの結合を示唆する。II)HTLVーI産生細胞(MT2細胞)の核質分画をグリセロ-ル密度勾配遠心法で分画すると、RexとU1RNPは共に沈査分画に存在した。このことは、細胞内でRexが巨大な複合体として存在することを示唆している。III)MT2細胞の核質分画をクロスリンク(DSPを使用)した後、SDSで溶解し、RNase存在下で、抗Sm抗体を用いて沈疫沈降した。その結果、RNaseはRexの共沈に影響しないことが分った。DSPを作用させない場合も同じであった。iV)RexはmRNA上のRexRE領域に結合する。RexReを有するmRNAの存在の、RexーU1RNA結合に対する影響を調べた。Rex発現プラズミドと、RexREを有するRNA生産プラズミドをコトランスフェクトした。その結果、RexREはRexとU1RNPとの結合に影響しないことが分かった。III)とIV)の結果は、RexとU1RNPの直接的な結合を示唆している。V)U1RNPとの結合に必要なRexの領域を決めるために、C末の欠失変異株を作成した。その結果、N末20アミノ酸が重要であることが分かった。又、この領域の欠失、点変異は、U1RNPとの結合を消失又は減弱させた。

To clarify the mechanism of Rex protein action in adult T cell leukemia (HTLV-I). To modulate the relationship between Rex and snRNP. i) Various anti-SNRNP antibodies (SLE patient serum, anti-SNRNP antibody, anti-SNRNP purified antibody) were used, immunoprecipitated, anti-U1RNP antibody and Rex co-precipitated. U1RNP and Rex are combined. II) Nuclear cytoplasmic mapping of HTLV-I producing cells (MT2 cells) was performed using a density matching remote center mapping technique. Rex and U1RNP co-mapping techniques were also performed. The presence of a large complex within a cell is a sign of the presence of Rex. III) MT2 cells were solubilized by SDS and precipitated by anti-Sm antibody in the presence of RNase. As a result, RNase can not be separated from Rex. DSP is the only one who can do this. iV)Rex mRNA binds to the RexRE domain. The presence of RexRe mRNA and the effects of Rex-U1 RNA binding are modulated. Rex is the first to appear on the RNA production platform, and Rex is the first to appear on the RNA production platform. The result is that Rex U1RNP has a negative impact on the results. III) and IV) are the results of Rex and U1RNP's direct combination. V)U1RNP and the necessary combination of Rex's field of decision, C end of the lack of different plants to create The result is that the N terminal 20 is very important. In addition, the field is missing, the point is different, and the combination of U1RNP is disappearing and weakening.