HTLV-I Rexの細胞相同体cDNAのクローニング

HTLV-I Rex 细胞同源 cDNA 的克隆

• 批准号: 04152061
• 负责人: 志田 壽利
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04152061/
• 关键词: HTLV-I; Rex; 細胞相同体; クローニング

HTLV-IのRexは核や核小体に存在し、HTLV-I mRNAのスプライシングや核から細胞質への輸送の制御を行っている。RexのN末端に対する抗体で、Rexの感染していない細胞の核小体が染色されることから、Rexの相同体が存在することを予想した。Rex相同体のcDNAをクローニングするために、この抗体をアフィニティー精製してから、λZapIIを用いたCV1細胞cDNAのライブラリーをスクリーニングした。80万個のプラークを調べたうち23個のポジティブなクローンを得た。次に核小体への局在を調べるために、pSRαを改変したEukaryote expression vectorに上記クローンを全てsukloneした。CV-1細胞やHeLa細胞にトランスフェクション後、上記抗体を用いた蛍光抗体法によって調べたところ、1つのクローンが核小体を染めることを見い出した。このクローンの塩基配列を決定したところ、70Kda以上の蛋白質をコードしている不完全なcDNAであることがわかった。又RexのN末端とやや似たアミノ酸配列が2ヶ所見い出された。Rexはcellular cofactorを共同して働いていると考えられている。そこで、Rexと機能的に関連していることを調べるために、Rexに対するTrans Dominant Inhibitionの性質を有するかどうか、23クローン全てについて調べた。その結果2クローンがRexの作用を昂進させた。現在、この現象を種々のレポーターを用して確認することを行っている。

HTLV -i の Rex は nuclear や nucleosome に し, HTLV -i mRNA の ス プ ラ イ シ ン グ や nuclear か ら cytoplasm へ の conveying の suppression を line っ て い る. Rex の N terminal に す seaborne で る antibody, Rex の infection し て い な い cells の nucleosome が dyeing さ れ る こ と か ら, Rex の exist same body が す る こ と を to think し た. Rex same body の cDNA を ク ロ ー ニ ン グ す る た め に, こ の antibody を ア フ ィ ニ テ ィ ー refined し て か ら, lambda ZapII を with い た CV1 cells cDNA の ラ イ ブ ラ リ ー を ス ク リ ー ニ ン グ し た. One hundred and eighty thousand <s:1> プラ を を を を べたうち23 <s:1> ポジティブな ロ ロ た を を を を を た た. Time に nucleosome へ の bureau in を adjustable べ る た め に, pSR alpha を change - し た Eukaryote expression vector に written ク ロ ー ン を full て suklone し た. CV - 1 cell や HeLa に ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン を, written after antibody with い た 蛍 light antibody technique に よ っ て adjustable べ た と こ ろ, 1 つ の ク ロ ー ン が nucleosome を dye め る こ と を see い out し た. こ の ク ロ ー ン の salt base with column を decided し た と こ ろ, more than 70 kda protein の を コ ー ド し て い る incomplete な cDNA で あ る こ と が わ か っ た. The とやや at the n-terminal of Rex is similar to that seen in the が2ヶ arrangement of たア and ノ acids, and the された is された. Rex て cellular cofactorを co-て て えられて て ると ると cofactor えられて る る. そ こ で, Rex と functionary に masato even し て い る こ と を adjustable べ る た め に, Rex に す seaborne る Trans Dominant Inhibition の nature を have す る か ど う か, 23 ク ロ ー ン full て に つ い て adjustable べ た. Youdaoplaceholder0 <s:1> result 2 ロ ロ が が がRex <s:1> effect を onjin させた. Now, こ の phenomenon を kind 々 の レ ポ ー タ ー を with し て confirm す る こ と を line っ て い る.

项目成果

Tanaka,T.,Masuda,M.,Yoshida,A.,Shida,H.,Nyunoya,H.,Shimotohno,K.,& Tozawa,H.: "Antigenic structure of the transactivator protein encoded by human T-cell leukemia virus type-I (HTLV-I),as defined by a panel of monoclonal antibodies." AIDS Res.Human Retrovi

田中 T.、增田 M.、吉田 A.、志田 H.、入野谷 H.、下野 K.、