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HTLV-I.Rexの細胞相同体cDNAの性質

HTLV-I.Rex 细胞同源 cDNA 的特性

基本信息

批准号：
05152061
负责人：
志田壽利
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05152061/
关键词：
Rex HTLV-I cDNA eIF5A

项目摘要

抗Rex抗体と交差する蛋白質をコードする遺伝子、又、核酸プローブを用いてlow stringentな条件で釣り上げたclonesを機能的にRexと相同であるかどうか調べたが、いづれもnegativeであった。そこで、機能を基にクローニングするため以下の2つのアプローチを行った。1.Rexの細胞側コファクターの同定:Rexはコファクターと一緒に働いていると考えられている。機能的なRex相同体はRexと同一のコファクターと相互作用しているはずである。そこでまずコファクターを同定することを試みた。そのためにRex及びHIVにおけるcounterpartであるRevのdominant-negative mutantの作用機能を分析した。その結果、標的RNAと結合できないRexのmutant(TAgRex)が、細胞側コファクターを取り去ることによりRex/Revの作用を制御していることを明らかにした。次にこの抑制を解除する因子を検索したところ、翻訳開始因子eIF5Aが見つかった。このことはeIF5AがRex/Revのコファクターであることを示す。そこでeIF5Aとの相互作用を指標に、Rexの細胞相同体のスクリーニングを開始する予定である。2.発現クローニング法の工夫:Rex/Revは標的RNAと結合する領域とコファクターと結合する領域に分けられる。そこで、RevのRNA結合領域(技術的な理由でRevを用いた)とのfusion蛋白としてcDNAが発現できるようなクローニングベクターを構築した。次に分泌型のHIVのEnvをRev依存的に発現するレポータープラズミドを作った。数ngのRev発現プラズミドとコトランスフェクトすることによりEnvの生産が認められた。これはcDNAライブラリーのスクリーニングに耐える鋭敏さである。活性化されたT細胞よりRNAを抽出し、cDNAライブラリーを作成し、スクリーニングを開始している。

Anti-Rex antibodies have the same function as Rex antibodies, which have the same function as Rex antibodies, such as protein, protein, nucleic acid, etc. The following are the basic functions of the system: 1. Rex's cell-side identity:Rex's cell-side identity: Rex is the same as Rex. The first time I saw him, I saw him. Rex and HIV counterpart of Rev dominant-negative mutant function analysis The result is that the target RNA binds to Rex's mutant(TAgRex), and the cell-side RNA binds to Rex's mutant (TAgRex). Second, the inhibition release factor is detected, and the inversion start factor eIF5A is detected. This is the first time I've seen Rex/Rev. The interaction between eIF5A and Rex was determined by the start of the interaction. 2. Time to develop a new method:Rex/Rev target RNA binding domain RNA binding domain (technical reasons for Rev) and fusion protein and cDNA discovery Subsecretory HIV Env. -dependent development A number of Revs are available for production. This is the first time I've ever seen a woman. Activation of T cells: RNA extraction, cDNA translation, and initiation of DNA translation