RNAポリメラ-ゼII転写開始複合体の活性化機構
RNA聚合酶II转录起始复合物的激活机制
基本信息
- 批准号:02258203
- 负责人:
- 金额:$ 1.09万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
- 财政年份:1990
- 资助国家:日本
- 起止时间:1990 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
RNAポリメラ-ゼII(polII)による転写開始機構、特に転写開始複合体形成における、1.ATP水解要求性と、2.キャッピング酵素の関与、について解析し、以下の結果を得た。<1.ATP要求性に関与する因子の探索>___ー:HeLa細胞抽出液を用いたpolIIによる<in>___ー <vitro>___ー転写開始反応は、ATPのγ位のリン酸基の水解に依存する。アデノウイルス後期主要プロモ-タ-を鋳型として転写開始反応を行なわせた場合、ATPの存在に依存して40ー50Sの転写開始複合体が形成された。分離した複合体は活性状態にあり、4NTPを添加すると、正確な位置からスタ-トしたRNA鎖を合成した。さらに、ATP非存在下に開始反応を行なった場合についても検討したところ、ある種の不活性な複合体(前開始複合体、約50S)が形成されていることが明らかとなった。分離した前開始複合体は、4NTPの添加のみでは転写活性を示さなかったが、HeLa細胞核抽出液中のタンパク質性因子の存在とATPの水解に依存して、活性複合体に転換され、転写活性を示した。HeLa細胞核抽出液より、前開始複合体を活性化する因子の精製を試みたところ、活性は少なくとも二つの相補的な分画に分離された。目下、各因子の精製とその機能解析を進めている。<2.キャッピング酵素の機能>___ー:ATP水解に依存して形成される活性転写開始複合体にはキャッピング酵素が特異的に組込まれ機能している。キャッピング酵素の機能をより詳細に理解するために、酵母キャッピング酵素遺伝子を用いて、酵素の機能ドメインの解析を行なった。まず、種々の人工欠失変異体を用いた実験から、酵素分子全体がその活性発現に重要であることが示唆された。また、T7RNAポリメラ-ゼを用いた大腸菌発現系を利用し、キャッピング酵素を大量にかつ高度に精製した。現在、この酵素を用いて、活性中心近傍のアミノ酸配列の決定を試みると共に、polIIとの相互作用の有無について検討している。
RNA fragmentation-II(polII): mechanism for initiation of transcription, formation of specific transcription initiation complex, 1. ATP hydrolysis requirements, 2. correlation of transcription enzymes, 3. analysis of transcription, and the following results were obtained. <1. ATP requirements and related factors>_<in>_<vitro>_ In the late stage of the game, the main form of the game is to start the game, and the existence of ATP depends on the formation of the game start complex. Isolation of the complex in the active state, 4NTP addition, the correct position of the RNA lock synthesis In the absence of ATP, the reaction begins and the inactive complex (pre-initiation complex, about 50S) is formed. Before isolation, the complex was activated by addition of 4NTP, and the existence of essential factors in HeLa cell nuclear extracts was dependent on ATP hydrolysis. HeLa cell nuclear extract, pre-initiation complex, purification of active factors, separation of active and complementary components At present, the refinement of each factor and the functional analysis of each factor are advanced. <2. Functions of enzymes>____:ATP hydrolysis dependent formation of active-initiating complex A detailed understanding of the function of the enzyme, yeast, enzyme, etc. The activity of the enzyme molecule as a whole is very important. T7RNA is highly purified by using a large amount of E. coli production system. Now, the enzyme is used in the middle, the active center is close to the determination of the acid alignment, and the interaction between polII and the middle is discussed.
项目成果
期刊论文数量(9)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
K.Mizumoto,K.Muroya,T.Takagi: "Transcription and mRNA capping of Sendai virus(HVJ)." The EMBO Journal.
K.Mizumoto、K.Muroya、T.Takagi:“仙台病毒 (HVJ) 的转录和 mRNA 加帽。”
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- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Y.Shibagaki,M.Kato,K.Mizumoto: "Localization of active site in yeast mRNA capping enzyme." Proceedings of the National Academy of Sciences,USA.
Y.Shibagaki、M.Kato、K.Mizumoto:“酵母 mRNA 加帽酶活性位点的定位。”
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
H.Yamada,S.Hayata,T.OmataーYamada,H.Taira,K.Mizumoto,K.Iwasaki: "Assocition of the Sendai virus C protein with nucleocapsids." Archives of Virology. 113. 245-253 (1990)
H. Yamada、S. Hayata、T. Omata-Yamada、H. Taira、K. Mizumoto、K. Iwasaki:“仙台病毒 C 蛋白与核衣壳的关联”113. 245-253 (1990)。
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Y.Shibagaki,N.Itoh,H.Yamada,S.Nagata,Y.Kaziro,K.Mizumoto: "Messenger RNA capping enzyme:Isolation and characterization of the gene encoding yeast mRNA guanylyltransferase." Journal of Biological Chemistry.
Y.Shibagaki、N.Itoh、H.Yamada、S.Nagata、Y.Kaziro、K.Mizumoto:“信使 RNA 加帽酶:编码酵母 mRNA 鸟苷基转移酶的基因的分离和表征。”
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- 发表时间:
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- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Z.Tsuchihashi,H.Yamada,K.Mizumoto: "Initiation complex formation in <in>___ー <vitro>___ー transcription system directed by RNA polymerase II:ATP requirement." The Journal of Biochemistry.
Z.Tsuchihashi、H.Yamada、K.Mizumoto:“由 RNA 聚合酶 II 指导的 <in>____ <vitro>____ 转录系统中起始复合物的形成:《生物化学杂志》。
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