mRNAキャッピングシステムの機能

mRNA加帽系统的功能

• 批准号: 09278224
• 负责人: 水本 清久
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09278224/
• 关键词: mRNAキャップ構造; RNAポリメラーゼII; 転写開始複合体; キャッピング酵素動態; in vitro転写反応; mRNAキャッピング

真核細胞mRNAキャップ構造は、RNAポリメラーゼII(polII)による転写の極めて初期に形成され,その後のmRNA代謝において重要なシグナルとして機能する.我々は,種々の生物のmRNAキャッピングの反応機構について、酵素化学的ならびに分子遺伝学的な手法を用いて解析している.これまでに我々は,酵母S.cerevisiaeのキャッピング酵素αサブユニット(RNAグアニル酸転移酵素)遺伝子(CEG1)のクローニングを行い,その活性部位を同定した(J.Biochem.118,1033,1995).今年度は,同酵素のβサブユニット(RNA5'-トリホスファターゼ)遺伝子(CET1)の単離を行い,それが酵母の生育に必須の遺伝子であり,活性中心が分子のC-末端側半分(345アミノ酸残基)にあることを示した(BBRC239,115,1997).また,α-βサブユニット相互作用の部位がC-末端側領域にあることを示した.さらに,ヒトキャッピング酵素遺伝子(hCAP1)のクローニングにも成功し,同酵素が,酵母のサブユニット酵素と異なり,1本のポリペプチド鎖中に,RNA5'-トリホスファターゼドメイン(N末端側)とRNAグアニル酸転移酵素ドメイン(C末端側)を併せもつ多機能酵素であることを証明した(BBRC,in press).キャップ形成がpolII転写産物に特異的に起こる機構を明らかにすることを目的に,転写開始複合体を活性状態で分離し(Nucleic Acids Res.25,4079,1997),キャップ構造形成関連酵素の有無を解析した.その結果,polII転写開始複合体にはキャッピングに関与する一連の酵素系,すなわち,RNAグアニル酸転移酵素,RNA5'-トリホスファターゼ,RNA(グアニン-7)メチル基転移酵素,およびRNA(リボース2'-O-)メチル基転移酵素が特異的に組み込まれ,機能していることを明らかにした.

Eukaryotic mRNA structure, RNA sequence II(pol II), early gene formation, and later mRNA metabolism are important for gene function. In response to this, the mRNA of species is analyzed by enzyme chemistry, molecular genetics, and reverse transcription mechanisms. In this case, the yeast S. cerevisae has been identified for its active site by determining the activity of the enzyme α-βThis year, the isoenzyme β-(RNA 5'-) gene (CET1) was isolated from the genome of yeast, which is essential for yeast growth, and the active center was identified as the C-terminal half of the molecule (345 amino acid residues)(BBRC239,115,1997). The site of interaction between α-β- In addition, the enzyme sequence of hCAP1 was successfully identified, isoenzyme, yeast enzyme and heteroenzyme, 1 in this study,RNA5'-terminal sequence was identified, and heteroenzyme sequence was identified (BBRC,in press). The structure of polII gene product was analyzed by means of the isolation of the gene complex (Nucleic Acids Res.25,4079,1997). As a result, the polII gene initiation complex is associated with a series of enzyme systems, such as RNA transaminase,RNA5'-transaminase, RNA(transaminase-7) transaminase,RNA(transaminase 2'-O-) transaminase, and RNA (transaminase 2'-O-) transaminase.

项目成果

T.Tsukamoto et al.: "Cloning and characterization of two human cDNAs encoding the mRNA capping enzyme." Biochem.Biophys.Res.Comm.(印刷中). (1998)

T.Tsukamoto 等人：“编码 mRNA 加帽酶的两种人类 cDNA 的克隆和表征。”（正在出版）。

M.Murakami et al.: "High level expression of exogenous genes by replication-competent retrovirus vectors with an internal ribosomal entry site." Gene. 202. 23-29 (1997)

M.Murakami 等人：“通过具有内部核糖体进入位点的复制能力逆转录病毒载体实现外源基因的高水平表达。”

H.Serizawa et al.: "The RNA polymerase II preinitiation complex formed in the presence of ATP." Nucleic Acids Res.25. 4079-4084 (1997)

H.Serizawa 等人：“RNA 聚合酶 II 预引发复合物在 ATP 存在下形成。”

A.Kurotani et al.: "The paramyxovirus,Sendai virus,C proteins are categorically nonessential gene products but silencing their expression critically impairs viral replication and pathogenicity." Genes to Cells. (印刷中). (1998)

A. Kurotani 等人：“副粘病毒、仙台病毒、C 蛋白绝对是非必需的基因产物，但沉默它们的表达会严重损害病毒的复制和致病性（正在出版）。”

T.Tsukamoto et al.: "Isolation and characterization of the yeast mRNA capping enzyme β subunit gene encoding RNA5'-triphosphatase,which is essential for cell biability." Biochem.Biophys.Res.Comm.239. 116-122 (1997)

T. Tsukamoto 等人：“编码 RNA5-三磷酸酶的酵母 mRNA 加帽酶 β 亚基基因的分离和表征，这对于细胞活性至关重要。”116-122（1997）。