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酵母ミニ染色体の分配に関与する遺伝子の解析

酵母微染色体分离相关基因的分析

基本信息

批准号：
02260212
负责人：
菊池淑子
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02260212/
关键词：
分配ミニ染色体遺伝子解析細胞周期酵母

项目摘要

酵母サッカロミセス・セレビシェの温度感受性変異株ts12について遺伝子解析を行った。ts性を相補するゲノムDNA断片をクロ-ニングし、サブクロ-ニング、ノ-ザン解析、cDNAライブラリ-からのDNA解析により、ts12遺伝子は5.4kbのmRNAをコ-ドしていることが判った。この遺伝子の破壊株は増殖することができるがアグリゲ-トを作りやすくなっていた。ts型との関連については、現在検討中である。約80%の領域についてDNA一次構造を決定したが推定されるアミノ酸配列から、遺伝子産物は親水性に富むタンパクでN末端附近にロイシンジッパ-を持ち、cdc2キナ-ゼやAキナ-ゼのタ-ゲット部位のコンセンサス配列を5ヵ所以上持つことがわかった。抗体を作製するため、N末端付近を含むDNA断片をTクプロモ-タ-下につなぎ,大腸菌内で分子量2万のタンパクを量産させた。精製後,ウサギに免疫して血清を得た。ウエスタン・ブロッティング法を行い,細胞破壊液中に約170Kdのバンドを検出した。このバンドは、ts12遺伝子をマルチコピ-ベクタ-につないで導入された細胞破壊液中で,濃く表われることから、ts12遺伝子産物であると固定した。今後は、この抗体を利用して、タンパクのリン酸の有無,cdc28変異株内での温度変化における挙動、細胞内における局在性の間題、さらにこのタンパクと相互作用している因子を探すなどして、この遺伝子の細胞周期における役割りを推測したい。

Yeast temperature sensitive mutants ts12 were analyzed. Ts12 DNA fragment analysis, cDNA analysis, Ts12 cDNA fragment analysis, Ts12 cDNA analysis This is the first time I've ever seen a woman who's grown up in this world. Ts-type About 80% of the domain DNA primary structure is determined, estimated, and determined. The hydrophilic property of the DNA product is rich in the N-terminal region, and the N-terminal region of the DNA is determined by the N-terminal region. Antibody production, N-terminal proximity, DNA fragments, molecular weight of 20,000 in Escherichia coli After purification, the immune serum was obtained. During the operation of theン·ンmethod, approximately 170Kd of the drug was detected in the cell disruption fluid. The protein was introduced into the cell-breaking solution, and the protein was concentrated and immobilized. In the future, the use of antibodies, the presence or absence of amino acids, temperature changes in cdc28 mutants, intracellular interactions, and factors affecting the cell cycle of cdc 28 genes will be explored.