液胞の物質集積機能に関する分子遺伝学的研究

液泡物质积累功能的分子遗传学研究

• 批准号: 02261206
• 负责人: 安楽 泰宏
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02261206/
• 关键词: 物質集積; 液胞; 酵母; H^+ーATPase; 生合成; 分子遺伝学; Ca^<++>ー感受性; クロ-ニング

酵母液胞の物質集積機能に関する分子遺伝学的研究を行ない、以下の成果を得た。1)液胞の生合成と容積を支配する遺伝子群(<VAM1>___ーー<VAM9>___ー;<va>___ーcuolar m__ーorphology)のクロ-ニングと機能の探索:酵母細胞には通常1個ないし数個の大きな液胞が存在する。物質集積能において重要な液胞の容積の決定がどのような分子装置、遺伝的制御系によって支配されているかは全く不明であった。本年度は、液胞形態不整・容積減少をもたらす遺伝的変異多数を分離し、液胞形態形成に関与する遺伝子群(<WAM1>___ーー<VAM9>___ー)を同定した。これらの遺伝子群のうち、<VAM1>___ー、<VAM5>___ー、<VAM8>___ー、<VAM9>___ー遺伝子上の変異は液胞の完全な、あるいは著しい容積の減少をもたらす。<VAM5>___ー遺伝子の構造と機能に関して詳細な解析を行った結果、この遺伝子が液胞の生合成過程、すなわち液胞タンパク質の液胞への局在化に必要なことが示された。2)液胞膜のH^+ーATPase(物質輸送系の駆動エネルギ-供給系)遺伝子群(<VMA1>___ーー<VMA6>___ー;v__ーacuolar m__ーembrane H^+ーA__ーTPase)遺伝子のクロ-ニングと多重発現:酵母液胞膜H^+ーATPaseの構造遺伝子<VMA1>___ー(67KDサブユニットa__ー)および<VMA3>___ー(16KDサブユニットc__ー)のクロ-ニング、遺伝子構造の解析を完了した。単離した遺伝子を用い遺伝子破壊株を作製し、その表現型を解析した結果、液胞H^+ーATPaseの機能欠失が培地中の高濃度Ca^<2+>に対する感受性を与えることを見いだした。この表現型を利用して、本酵素を構成する他のサブユニットの構造遺伝子をクロ-ニングした。

The following results were obtained from molecular genetics research related to the substance accumulation function of yeast cells. 1)A <VAM1><VAM9><va>study on the function of cuellar morphology: yeast cells usually contain one or more large cuellar cells. The determination of the volume of the important liquid cell in the accumulation of matter is not clear in the control system of molecular devices and genetic materials This year, the cell morphology is not uniform, the volume is reduced, and the majority of the cells are separated. The cell morphology is related to the number of cells (<WAM1>__<VAM9>___). The <VAM1><VAM5><VAM8>complete <VAM9>and reduced capacity of the different liquid cells on the two groups of cells <VAM5>The results of detailed analysis of the structure and function of the gene, the process of cell formation and synthesis of the gene, and the necessary conditions for the transformation of the cell structure and the cell structure are presented. 2)H^+-ATPase(substance transport system) gene subgroup (<VMA1>__<VMA6>_;v__acuolar m__membrane H^+-A___Tase) gene structure analysis: yeast H^+-ATPase structure gene<VMA1>__<VMA3>_ The results of phenotypic analysis of isolated DNA fragments and the functional deficiency of cellular H^+-ATPase were compared with those of high Ca^+&gt; concentrations in cultured soil. This phenotype is utilized to construct other structural genes.

项目成果

Hirata,R.: "Molecular structure of a gene,<VMA1>___ー,encoding the catalytic subunit of H^+ーtranslocating adenosine triphosphatase from vacuolar membranes of <Saccharomyces>___ー <cerevisiae>___ー." J.Biol.Chem.265. 6726-6733 (1990)

生物化学杂志265。6726-6733（1990）

Wada,Y.: "The <SLP1>___ー gene of <Saccharomyces>___ー <cerevisiae>___ー is essential for vacuolar morphogenesis and function." Mol.Cell.Biol.10. 2214-2223 (1990)

Wada, Y.：“<Saccharomyces>___- <cerevisiae>___- 基因对于液泡形态发生和功能至关重要。”Mol.Cell.Biol.10 (1990)。

Umemoto,N.: "Roles of the <VMA3>___ー gene product,subunit c__ー of the vacuolar membrane H^+ーATPase on vacuolar acidification and protein transport." J.Biol.Chem.265. 18447-18453 (1990)

Umemoto, N.：“<VMA3>____ 基因产物，液泡膜 H^+_ATP 酶亚基 c___ 对液泡酸化和蛋白质转运的作用。”J.Biol.Chem.265。 (1990)