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カチホンポンプ

胜本泵

基本信息

批准号：
62617001
负责人：
安楽泰宏
金额：
$ 20.35万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至 1989
项目状态：
已结题

项目摘要

安楽は非定常状態酵素反応解析法と^<60>Co放射実験を組み合わせることにより, 酵母液細胞H^+-ATPaseが多量体構造をもち, ATPの加水分解時に単量体および多量体活性部位間に正の協同作用が発現されることを認めた. 旭および大熊はケツルアズキ細胞膜およびラット肝リソゾーム膜に存在するH^+-ATPaseの分子構築とサブユニットに関する新知見を得た. 金沢は特異的-SH基蛍光プローブを用い, 筋小胞体Ca^<2+>-ATPaseのCa^<2+>輸送部位およびATP加水分解部位へのCa^<2+>結合時に生ずるコンホーメーション変化を解析した. 川喜多はATP-ポリピリドキサール誘導体を用いて当該酵素のATP結合部位がLys^<684>であることを決定し, この残基の分子内3次元位置がASP^<351>に隣接していることを示した. 又川喜多は, 常磁性イオンMn^<2+>がCa^<2+>の拮抗力チオオンとして筋小細胞体膜内を輸送されることを示し, スピンラベルされた膜結合Ca^<2+>-ATPaseのカチオン輸送時の分子的振舞いを解析する実験系を開発した. 中尾はラット脳NaK-ATPaseのCDNAライブラリーを精査し, 従来のα, α^+サブユニットに加え, 第3のαサブユニットの構造遺伝子の存在を認め, その塩基配列を決定した. この結果にもとづき, 既知の2遺伝子とのホモロジー, 構造特性を解明した. 長野はヒトNaK-ATPaseの膜内集合機構に関する研究を推進した. 本酵素のαサブユニットは6本の膜貫通ポリペプチド(TM1-6)をもつ疏水性蛋白である. 長野はTM1-2, TM3-4, TM5-6の各疏水性ドメインのみを持つ部分αサブユニットクローンを作成し, invitroシステムにおける各決失遺伝子の発現と膜への組みこみを検討し, TM1-2およびTM3-4のペプチドはコトランスレーショナルにくみこまれること, TM5-6ペプチドはこの活性が完全に欠落していることを認めた.

The enzyme reaction analysis method of non-steady state <60>of ATP is used to analyze the structure of H^+-ATPase in yeast cells, and the positive synergy between the active sites of single and multiple bodies is recognized during ATP hydrolysis. The molecular architecture of H^+-ATPase and its relationship with cell membrane structure were studied. The Ca^<2+> transport site of the Ca ^<2 +>-ATPase and the Ca^<2 +> binding site of the ATP hydrolysis site were analyzed. When the ATP-binding site <684>of the enzyme is determined, the three-dimensional position of the residue in the molecule is determined<351>. In addition, the antagonistic force of Mn^<2 +> and Ca^<2+> in normal magnetic field was demonstrated, and the molecular vibration during the transport of membrane-bound Ca^<2+>-ATPase was analyzed. The DNA sequence of the NaK-ATPase in the middle of the tail was carefully investigated, and the α, α^+ and α^+ sites were added. The existence of the structural gene of the third α ^+ site was recognized, and the sequence of the α ^+ sites was determined. As a result, the structural characteristics of the two known genes are clarified. Nagano has advanced the research on the intracellular aggregation mechanism of NaK-ATPase. The enzyme αNagano TM1-2, TM3-4, TM5-6 of each hydrophobic phase of the membrane to maintain the partial alpha phase of the membrane to prepare, invitro phase of each of the determination of the loss of molecular generation and membrane composition of the membrane to study, TM1-2 TM3-4 of the selection phase of the membrane to determine the activity of the membrane to completely understand.