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カルシウム-カルモジュリン情報伝達系に関する分子生理学的研究

钙-钙调蛋白信号系统的分子生理学研究

基本信息

批准号：
63641505
负责人：
安楽泰宏
金额：
$ 1.15万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-63641505/
关键词：
カルモジュリン酵母ニワトリ核分裂遺伝子発現

项目摘要

カルモデュリン(CaM)はCa^2結合タンパク質であり、数多くの酵素活性を調節することから細胞内の主要なCa^2受容体として考えられてきた。分子生物学的な解析から、酵母(Saccharomyces cerevisiae)においてはCaMは細胞増殖に必須であり、特に細胞周期の核分裂に重要な働きをしていることが示されている。しかし酵母のCaMと高等生物のCaMは一次構造上アミノ酸配列で約60%しかホモロジーがないため、細胞増殖、核分裂における酵母CaMの必須性も高等生物のCaMにまで一般化できるかどうか不明であった。そこで本研究では高等動物のCaMと酵母のCaMとに機能的に互換性があるかどうかを調べた。まず鶏CaMのcDNAを酵母内で働くCALIプロモーター下につなぎ、ガラクトースで鶏CaMを発現できるpGCAM211プラスミドを作成した。そしてこのプラスミドが、酵母のCaMの遺伝子破壊株を相補出来るかどうかを調べた。CaMは増殖に必須であるためその遺伝子破壊株は増殖できないがpGCAM211を持たせると増殖可能となった。またこの株の増殖はガラクトース依存であったので、鶏CaMの発現により酵母CaM遺伝子破壊株が増殖可能になったことが示唆された。さらに酵母のCaMと鶏CaMとが免疫交差しないことを利用して、確かにCaMの遺伝子破壊株では酵母のCaMは発現していないこと、酵母内で鶏CaMが発現していることをウェスターンブロティングにより示した。また鶏CaMを発現している酵母からCaMを精製し、生化学的性質を調べてみると、鶏CaMのそれと同一であった。以上の結果は鶏CaMが確かに酵母内で発現していて、酵母のCaMの遺伝子破壊株を相補していることを示しており、機能的にみて酵母のCaMと鶏CaMは相同であることが示された。さらに鶏CaMの発現を停止させた時、細胞はやはり核分裂ができずに増殖を停止した。従って核分裂における必須性において、CaMは酵母から鶏までよく保存されていることがわかった。

Ca2-binding protein (CaM) regulates the activity of several enzymes in the cell, including the main Ca2 receptor. Molecular biology analysis, yeast (Saccharomyces cerevisiae) and CaM cell proliferation must be, especially cell cycle and nuclear division of the important factors. CaM of yeast and CaM of higher organisms are about 60% of the primary structure, acid alignment, cell proliferation and mitosis. CaM of yeast is essential for CaM of higher organisms. This study focuses on the interchangeability of CaM and yeast functions in higher animals. The cDNA for CaM was generated in yeast by pGCAM211. In addition, the yeast and CaM gene can be used to supplement each other. CaM must be propagated, and its descendants must be propagated. pGCAM211 can be propagated. The growth of yeast CaM is dependent on the growth of yeast CaM. The yeast CaM and CaM are immune to each other. The yeast CaM and CaM are immune to each other. CaM is produced by yeast, purified by CaM, and chemically modified by CaM. The above results show that CaM can be found in yeast, CaM can be found in yeast, CaM can be found in yeast and CaM can be found in yeast. When CaM production stops, the cell begins to divide and grow. It is necessary for nuclear fission to be carried out, CaM is necessary for yeast to be carried out and CaM is necessary for yeast to be carried out.