ラットDNAポリメラ-ゼβとDNA複合体の結晶化

大鼠 DNA 聚合酶 β 和 DNA 复合物的结晶

• 批准号: 02263206
• 负责人: 白木原 康雄
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Hyogo University of Teacher Education
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02263206/
• 关键词: ラットDNAポリメラ-ゼβ; X線結晶解析; オリゴヌクレオチド; 結晶化

ラットDNAポリメラ-ゼβとDNAとの相互作用、即ちポリメラ-ゼ活性の機能構造相関をX線結晶解析を用いて明らかにすることを目指し、DNAポリメラ-ゼβとオリゴヌクレオチドとの複合体の結晶化実験を行った。この実験の背景は以下の様である.DNAポリメラ-ゼβはDNAポリメラ-ゼ活性のX線結晶解析を用いた機能構造相関を探るのに良い系と私係は考えている。理由の一つは、この酵素は分子量4万の単一のポリペプチド鎖で、数あるDNAポリメラ-ゼの中で最小のものだからである。次には私達の研究で、この高純度の標品を使うことにより、酵素だけの小さい結晶、基質dATPとの複合体の薄い板状結晶が得られているからである。基質dATPとの複合体は、ポリエチレングリコ-ル(PEG)と各種の塩(ポリメラ-ゼ反応は少量の塩を必要とする)の共存下でできたので、先ずこのような条件下で結晶化条件を捜した。この時、以下のようなDNAオラゴマ-を用いた時に小さい針状の結晶が得られた.(1)テンプレ-トープライマ複合体モデルとして12merテンプレ-トAGACCGGCCCGGと9merプライマCCGGGCCGGを用いた場合。MgdATP存在下で小さい(0.1x0.01x0.01mm)針状の結晶が得られた。(2)10mer(dT10)を用いた場合。(1)と同様な条件下で同じような結晶が得られた。しかしMgdATPを加えない場合、また加えても短いDNAオリゴマ(dT4)を用いた場合結晶は得られなかった。従ってこれらの結果から、ポリメラ-ゼβーDNA複合体結晶を得るには、(1)10mer程度の長さを持つDNAフラグメントを用いる、(2)MgdATPを共存させる、の二つの必要な点が明らかになった。このようにポリメラ-ゼβーDNA複合体結晶を得ることができたが、結晶の大きさが十分ではなく更にこれから結晶化条件を検討していく必要がある。

Because of the interaction between DNA and β-DNA, that is, the X-ray structure of the active machine can be used to analyze the X-ray structure of the computer, the target of the target and the complex of the DNA will be crystallized by the combination of the target and the β-ray. The following information is related to the background. The following is the analysis of the X-ray crystal structure of the β-DNA spectrum-the X-ray crystal analysis of the X-ray diffraction. The reason is that the molecular weight of the enzyme is 40000, the molecular weight of the enzyme In the second part of the study, the standard of high temperature has been used to obtain the results of the thin plate crystal of the complex of the enzyme, the enzyme, and the complex of the dATP. In the case of the coexistence of the basic dATP complex and the PEG, the crystallization conditions are different under the condition of the coexistence of a small number of essential drugs, and the crystallization conditions are not affected. At the same time, the following steps have been successfully performed. (1) the combination of short-term DNA and short-term CCGGGCCGG has been successfully verified. (1) the combination of AGACCGGCCCGGGCCCGGGGCCCGGG9mer and AGACCGGCCCGGGGCCCGGGGCCCGG9mer. In the presence of MgdATP, there is a small number of crystals (0.1x0.01x0.01mm) in the crystal shape. (2) 10mer (dT10) is used in combination. The main results are as follows: (1) under the condition of the same temperature, the results of the same experiment have been obtained. The combination of the MgdATP and the short DNA connection (dT4) will result in the reduction of the temperature. The results showed that: (1) the degree of 10mer persisted. The results showed that: (1) the degree of 10mer persisted. The results of the results showed that: (1) the degree of 10mer persisted in the long term, and (2) the co-existence of MgdATP was detected. The crystallization conditions of the β-DNA complex were much higher than that of the control group, and the crystallization conditions were much higher than that of the β-β-DNA complex.

项目成果

白木原 康雄.松影 昭夫: "ラットDNAポリメラ-ゼβの結晶化" 日本生物物理学会年会講演予稿集(口頭発表).

Yasuo Shirakihara 和 Akio Matsukage：“大鼠 DNA 聚合酶 β 的结晶”日本生物物理学会年会论文集（口头报告）。