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膜ATP合成酵素回転触媒機構の構造生物学

膜ATP合酶旋转催化机制的结构生物学

基本信息

批准号：
17053028
负责人：
白木原康雄
金额：
$ 1.98万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17053028/
关键词：
膜酵素 ATP ATP合成酵素 FoF1 結晶化界面活性化剤

项目摘要

膜酵素ATP合成酵素(FoF1)は、呼吸鎖がくみ出した水素イオンを膜貫通のFo部分(ab2c8-12)で取り込み、膜外部分F1上でADPとPiからATPを合成する.私たちはFoF1の構造解析を目指しその結晶化を行ってきた。昨年度、decylmaltoside (10M)またはdodecylmaltoside (12M)で可溶化、精製した標品がつくる六角形板状結晶が7A程度の回折模様を示すことをみた。今年度はこの結晶の高質化のための精製、結晶化実験、並びに回折模様の解析を行った。1.結晶の高質化(1)最良と考えていた界面活性化剤10Mと12Mの間に、種々の点で違いがあることがわかった。10Mを用いた場合、(1)イオン交換カラム精製時に狭い塩濃度領域で溶出する、(2)ゲル濾過ではボイド画分に出現しない、という特徴が見られた。一方12Mの場合、(1)イオン交換カラム精製時に広い塩濃度領域(0.4~0.5M)で溶出し、0.4Mで溶出する画分よりも0.5Mで溶出する画分の方が結晶化能が良い,(2)ゲル濾過ではボイド画分に出現にも出現するのでこれを除く事で結晶化能が良くなる、の特徴を確認した。(2)膜からの抽出時共存ヌクレオチドの効果を調べたが、何も加えなかった時と比べて改善は見られなかった。(3)更に最近行っているレーザー光照射による結晶の高質化の実験では、レーザー光照射が結晶化を促進するという予備的結果を得た。2.回折模様の解析回折模様が低分解能で、高いモザイク性(1.5度)を示すため英国MRC子生物学研究Andrew Leslie博士と一緒にMosflmで解析を試みたがindexが不可能であった。蘭国Leiden大学Jan Pieter Abrahams教授と討論したところ、低分解能、高いモザイク性の場合にはMosflmよりもxdsが適していることが教示され、実際xdsを使うとindex、integrationと進んだが、xdsでのビーム位置の与え方が十分に正確でないため,いま少しの試行錯誤が必要である。

Membrane enzyme ATP biosynthesis enzyme (FoF1), respiration enzyme, water element, water, membrane, Fo (ab2c8-12), ADP, Pi, ATP, outside the membrane. The analysis of the private information system FoF1 system refers to the crystallization of the data. Last year, the decylmaltoside (10m) alloy dodecylmaltoside (12m) was soluble and refined. The hexagonal plate-like crystal was 7A degree and the folded mold showed that it had a high temperature. The results of this year's test show that you will improve the quality of the test, crystallize the results, and analyze the results of the analysis model. 1. The results are as follows: (1) the best test results are as follows: (1) the interface between 10m and 12m is active. The 10m system is used, (1) the precision of the system is resolved in the field of precision, and (2) the error is detected by the analysis of the image. One side 12m, (1) in the field of accuracy (0.4m 0.5m), 0.4m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m, 0.5m (2) when the membrane is pulled out, it is necessary to improve the temperature response of the membrane. (3) to improve the results of the recent photoluminescence test, the crystallization of the photoluminescence and the crystallization of the photoluminescence device. two。 The analysis of the foldback mode shows that it is impossible to analyze the low decomposition energy and high temperature temperature (1.5 degrees) of the British MRC sub-biology research Dr. Andrew Leslie, Dr. Mosflm, index. Professor Jan Pieter Abrahams of Leiden University in China discussed how to improve the performance of Mosflm, low decomposition energy, high temperature, low energy, high temperature, high temperature, low decomposition energy, low decomposition energy, high temperature, low decomposition energy, low decomposition energy, high temperature, low decomposition energy, low decomposition energy, high temperature, low decomposition energy, low decomposition energy, high temperature, low decomposition energy, low decomposition energy, high temperature, low decomposition energy, low decomposition energy, high temperature, low decomposition energy, low decomposition energy, high temperature, low decomposition energy, low decomposition energy, high temperature, low decomposition energy, low decomposition energy, high temperature, low decomposition energy, low decomposition energy, high temperature, low decomposition energy, low decomposition energy, high temperature, low decomposition energy, low decomposition energy, high temperature, low decomposition energy, low decomposition energy, high temperature, low decomposition energy, low decomposition energy and high temperature.