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膜ATP合成酵素回転触媒機構の構造生物学

膜ATP合酶旋转催化机制的结构生物学

基本信息

批准号：
18054032
负责人：
白木原康雄
金额：
$ 4.54万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18054032/
关键词：
膜酵素 ATP ATP合成酵素 FoF1 結晶化界面活性化材界面活性化剤

项目摘要

膜酵素ATP合成酵素(FoF1)は、呼吸鎖がくみ出した水素イオンを膜貫通のFo部分で取り込み、膜外部分F1上でADPとPiからATPを合成する.私たちは好熱菌PS3由来のFoF1の構造解析を目指た結晶化を行い、decylmaltoside(10M)またはdodecylmaltoside(12M)で可溶化、精製した標品がつくる六角形板状結晶が7A程度の回折模様を示すことをみた。今年度は昨年度に引き続き、FoF1結晶の高質化のためのソースとなる新規の細菌の探索、並びに従来得られている回折模様の解析を行い、以下のような結果を得た。1.結晶の高質化これまで最良と考えてきた界面活性化剤12Mを用いて精製したPS3由来の標品が,この2年半、従来のような大きさの結晶にならなくなった。そこでBacillusなどの入手容易な実験室で確立した菌5種、および高温環境の野外から採取した菌15種について、菌、増殖の特性、膜のとれやすさ、FoF1のとれやすさについて検討を行い、後の2点でPS3に比べて優れている野外菌株を見いだした。2.回折模様の解析低分解能で、高いモザイク性を示す回折模様の検討のため、今年度は従来のMosflm、xdsに加えてHKL2000,d*trekのパフォーマンスの検討を行ったが、抜き出たパフォーマンスを示すものはなかった。そこでMosflmを用いて引き続き解析を行った。Autoindexの際のビーム位置の問題は昨年度解決したので、その結果得られたcell定数を用いて、integrationの際全てのrefineを停止させ、10フレームごとにautomatch optionをかけることによって、約60度分のフレームを処理できた(昨年は20度分)。これを良くするためには完壁なcell定数を探すことが必要で、現在この線に沿った努力が進行中である。

Membrane enzyme ATP synthase (FoF1) is located on the Fo part of the membrane and on the F1 part of the membrane. The structural analysis of FoF1 from PS3 indicates that crystallization, decylmaltoside(10M) and dodecylmaltoside(12M) are soluble, refined and standard products. This year, we introduced the new method of improving the quality of FoF1 crystals, explored the new method of bacteria, and analyzed the reverse folding mode. The following results were obtained. 1. Crystallization of the highest quality of the interface active agent 12M is used in the refining of PS3 origin of the standard product, this two and a half years, the future of the crystallization of the large number of 5 species of Bacillus were identified in the laboratory and 15 species were collected in the field under high temperature environment. The characteristics of bacteria, propagation, membrane, FoF1 and FoF1 were discussed in the middle of the study. The PS3 was better than the PS3 in the middle of the study. 2. Low resolution energy, high resolution, low resolution, high resolution, high Mosquitoes are used in the analysis. The problem of Autoindex's position was solved yesterday, and the result was that the number of cells was determined, and the integration was completely refined. The problem was solved yesterday, and the automatch option was stopped at 10 ° C. The problem was solved at about 60 ° C. The problem was solved yesterday (20 ° C.) We are working hard on this project.