パルスラジオリシス法による酸素添加酵素による反応中間体構造の解明

使用脉冲辐射分解法阐明氧化酶反应中间体的结构

• 批准号: 03241218
• 负责人: 小林 一雄
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03241218/
• 关键词: シトクロ-ムPー450_<cam>; ス-パ-オキサイドアニオン; 酸素添加酵素; パレスラジオリシス; ストップトフロ-法

酸素添加酵素であるシトクロ-ムPー450_<cam>がおこなう一連の反応において,最も重要でかつ不明な点は酸素化型Pー450_<cam>の一電子還元後生成する中間体の構造と,その中間体がどのようにして基質を水酸化するかである.本研究ではこの反応中間体をとらえる手段として,Pー450_<cam>および西洋ワサビペルオキシダ-ゼ(HRP)の還元型とス-パ-オキサイドアニオン(O_2)との反応について検討した.まず還元型Pー450_<cam>とO_2^-との反応により生成する中間体が基質であるDーカンファ-を水酸化するどうかについて検討した.その結果カンファ-の水酸化が見られ,この反応はカタラ-ゼには影響されず,ス-パ-オキサイドディスムタ-ゼ(SOD)によって阻害された.これらの結果より,還元型Pー450_<cam>とO_2^-との反応によって生成する中間体が基質を水酸化していると結論できる.本研究ではO_2^-と還元型ヘムとの反応程度はパルスラジオリシス法のかわりに9:1混合できるストップフロ-法を用い,酵素量9に対してDMSOに溶解したKO_21を混合した.還元型HRPとO_2^-の反応では,混合後直ちにFe^<4+>=Oポルフイリンπカチオンラジカルと考えられてるCompound Iが生成することが分かった.一方還元型Pー450_<cam>とO_2^-の反応では混合後5msに反応中間体が生成し,500ms後に酸化型Pー450_<cam>が生成することが分かった.この最初に生成する中間体のスペクトルは酸素化型とよく似ており、この中間体が基質を水酸化し、最終的に酸化型に戻っていることが確められた。

The most important thing is that the most important point is that the acidified Pentagon 450 _ & lt;cam> is produced after the reduction of the number of elements. In the middle of the experiment, the temperature in the body is reduced and the temperature is reduced. In this way, the temperature in the body is acidified. In this study, P450 _ & lt;cam>

项目成果

Kazuo Kobayashi: "The Active Oxygen Species of Cytochrome Pー450_<cam>" the Jonrnal of the American Chemical Society.

Kazuo Kobayashi：“细胞色素 P-450_<cam> 的活性氧”，美国化学会杂志。

Kazuo Kobayashi: "Reaction of O_2^- with the Ferrous Hemoproteins" Biochemistry.

Kazuo Kobayashi：“O_2^- 与亚铁血红蛋白的反应”生物化学。