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短寿命活性種をシグナルとするセンサー蛋白質の構造と機能

使用短寿命活性物质作为信号的传感器蛋白的结构和功能

基本信息

批准号：
12147205
负责人：
小林一雄
金额：
$ 17.66万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

酸化ストレスが増大するど、防御修復系タンパク質の活性誘導される現象が広く生物界に見られる。大腸菌において、スーパーオキサイドアニオン産生に応答する遺伝子の発現調節に関わる調節因子であるSoxRが単離されている。SoxRは、転写制御部位に鉄イオウクラスターを持ち、その酸化還元により転写調節するというユニークな性質を有し、その特異な構造と機能は注目される。本研究では、大腸菌におけるSoxRに依存した酸化ストレス応答の分子機構を明らかにすることを目的としてSoxRのX線構造解析を目的として結晶化を試みてきた。その結果得られた結晶を用いて、X線回折実験を行ったところ、最高で3.8Å分解能を超え,る反射が確認できた。またSoxRの鉄イオウクラスタードメインのNMRによる測定を行い、現在まで知られている鉄イオウクラスターとは全く異なるスペクトルを得られ、その特異な構造が示唆された。このSoxRと同様なアミノ酸配列を持つタンパク質が種々のバクテリアにも存在している。しかしながらE.coliと異なり、いずれのバクテリアにおいても酸化ストレス応答に必要なもうひとつの転写因子であるSoxSが存在しない。またsoxRの5'上流にSoxRタンパク質の結合領域と相同の配列と未知のタンパク質のORFが存在している。そこで、本研究では、P.aeruginosaおよびVibrio choleraにおけるSoxRを大量発現、精製を行い、その機能について調べた。いずれののSoxRは鉄イオウクラスターに特徴的な吸収スペクトルを持ち、またその酸化還元電位もE.coliと同様な値を示した。精製したタンパクはSoxR配列の5'上流に存在するE.coliにおけるsoxSプロモーターと同様な配列を持つDNA fragmentに結合することがfluoresence polarizationにより確かめた。またP.aeruginosaのすぐ上流に存在する未知のタンパク質のin vitroでの転写活性が見られ、この活性がSoxRの酸化運元により制御されていることが分かった。以上の結果より、SoxRは酸化ストレス以外の多様な応答遺伝子として働いていることが明らかになった。

Acidizing is very important, and the defense system is active. It is like the biological world. Please tell me that you have to answer the question. You can see that the SoxR is isolated. The SoxR, the system parts, the system, the machine, the machine. The purpose of this study is to determine the SoxR X-ray analysis of SoxR X-ray analysis. The purpose of this study is to analyze the molecular mechanism of SoxR X-ray analysis. The results show that the results show that the temperature is high, the X-ray is folded back, the decomposition energy of the highest temperature is 3.8, and the reflection is confirmed. This is the first time that the SoxR has been tested and that the NMR has been tested. Now that you know that the test line is not correct, you should know that the whole situation is not correct, and that the system has been made to show that you are not. In the same way as SoxR, there is a significant difference in the availability of different kinds of food and gas. Please answer the question that it is necessary to write a factor called SoxS that exists in E.coli. In the upper stream of soxR 5', there is a link between the SoxR and the same field. The configuration is unknown. The ORF is unknown. In this study, P.aeruginosa, Vibrio cholera, and SoxR, there are a large number of discoveries, refinements, and mechanisms that can be used in this study. Do you want to use the SoxR equipment to maintain and acidify the electrical potential of the device? the E.coli is the same as the one. In order to ensure that there is an upstream of 5'in the SoxR configuration, there is an E.coli configuration, the soxS configuration, the DNA fragment configuration, the combination of the fluoresence polarization configuration, the fluoresence polarization configuration, the configuration, the configuration and the configuration. In the upper class of the P.aeruginosa, there are some unknown information, such as the writing activity of the in vitro, the activity of the SoxR, the acidification of the acid, the control of the system, and the separation of the components. In addition to the above results and SoxR acidification, please do not answer any questions. Please do not know if you are going to have a problem.